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附件3 消毒产品中氯霉素（chloromycetin ）测定- 液相色谱-串联质谱法 Method for determination of chloromycetin in disinfestion product- LC-MS-MS method 1 范围 本方法规定了膏霜类消毒产品中氯霉素残留量液相色谱-串联质谱测定方法。 本方法适用于膏霜类消毒产品中氯霉素残留量的测定。 取样量为0.2g时，本方法氯霉素的检出限0.03mg/kg。 2 规范性引用文件 3 原理 试样中氯霉素0.45μm滤膜C8柱分离后，用液相色谱-串联质谱仪测定，负离子扫描，离子对定性，峰面积定量。5.1 液相色谱一串联质谱联用仪：HP1100高效液相色谱仪(Agilent) - API 4000质谱仪(Applied Biosystems) ， (ESIMS， NI/PI)。 5.2 分析天平：感量0.1mg和0.001g。 5.3实验室纯水机：Barnstead纯水机。 5.4涡旋振荡器：Scientific Industries 涡流振荡器。 5.5 具塞试管：10mL。 6 试样的制备与保存 6.1 试样的制备 取有代表性样品5g，搅拌均匀，制成实验室样品。 6.2 试样保存 制备好的试样置于室温保存。 7 测定步骤 7.1样品前处理 称取0.1~0.2g样品 (精确到0.001 g) ，置于10mL试管中，加入3.00mL甲醇溶液，涡旋振摇使样品分散后，超声振荡10min。静置，吸取上清液经滤膜C8，5μm，150×4.2mm； b）柱温：25℃； c）流动相：甲醇+水（60+40）， 等度淋洗10min； d）流速：300μL /min； e）进样量：10μL。 7.4.2 质谱条件 a）离子化方式：热喷雾电离CAD)：11.0 psi； e）气帘气(CUR)：14.0 psi； f）雾化气加热气 7.4.3 液相色谱-串联质谱测定 7.4.3.1 定性测定 用氯霉素的定性离子对（m/z 321.0/151.0和321.0/255.2）进行定性。 7.4.3.2 定量测定 将标准中间溶液用甲醇稀释配制成0-500ng/mL的标准使用溶液，在仪器最佳工作条件下，标准使用溶液分别进样，以标准使用溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。采用外标法进行定量测定。样品溶液中氯霉素的响应值应在标准曲线线性范围内。在上述色谱条件和质谱条件下，氯霉素标准物质液相色谱-串联质谱的多反应监测（MRM）色谱图参见图A.1。 7.5 平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定，平行测定相对偏差应小于10%。 7.6 空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤同时完成空白试验。 8 结果计算 样中氯霉素的质量 式中，( (( 中氯霉素的质量，g/kg； (1((从回归方程中查出氯霉素的质量浓度，ng/mL；V1 ((提取溶液体积mL； ((称样量，g。 精密度和准确度 同一实验室对实际样品和加标样品重复测定，相对标准偏差为4.0%(数据参见附录B)。低浓度平均回收率为77.2%，相对标准偏差为8.4%；高浓度平均回收率为109%，相对标准偏差为9.5%(本方法的添加回收率数据参见附录C)。 附录A (资料性附录) 氯霉素氯霉素氯霉素附录B (资料性附录) 精密度 消毒产品中氯霉素氯霉素附录C (资料性附录) 回收率 消毒产品中氯霉素氯霉素 标准差（%）： 6.5 CV（%）： 8.4 表C.2 消毒产品中氯霉素 标准差（%）： 10.4 CV（%）： 9.5 - 25 -