优化指导　高考生物人教版总复习课件：选修3 专题一 基因工程.pptVIP

一、基因工程的基本操作工具 1．与DNA分子相关的酶 (1)几种酶的比较 　 种类 项目 限制酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 解旋酶 作用底物 DNA分子 DNA分子片段 脱氧核苷酸 DNA分子 作用部位 磷酸二酯键 磷酸二酯键 磷酸二酯键 碱基对间的氢键 　 种类 项目 限制酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 解旋酶 作用特点 切割目的基因及载体，能专一性识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开 将双链DNA片 段“缝合”起来，恢复被限制切开了的两个核苷酸之间的磷酸 二酯键 只能将单个脱氧核 苷酸添加 到脱氧核 苷酸链上 将DNA两条链之间的氢键打开 作用结果 形成黏性末端或平末端 形成重组DNA分子 形成新的DNA分子 形成单链DNA分子 (2)限制酶与DNA连接酶的关系 ①限制酶不切割自身DNA的原因是：原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。 ②DNA连接酶起作用时不需要模板。 2．载体 (1)作用 ①作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内。②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 (2)具备的条件 ①能在宿主细胞内稳定保存并大量复制。②有多个限制酶切割位点，以便与外源基因连接。③具有特殊的标记基因，以便进行筛选。 (3)种类 ①质粒：一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，能够自我复制的很小的双链环状DNA分子。②λ噬菌体的衍生物。③动植物病毒。 【特别提醒】(1)一般来说，天然载体往往不能满足人类的所有要求，因此人们根据不同的目的和需要，对某些天然的载体进行人工改造。(2)限制酶切割位点所处的位置必须是在所需的标记基因之外，这样才能保证标记基因的完整性，有利于对目的基因的检测。 1．下列关于基因工程的叙述，错误的是(　　) A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶 C．人胰岛素基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性 D．载体上的抗生素抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达 解析：基因工程中目的基因来源于自然界中的含有目的性状的一切生物，可以是动物、植物，也可以是真菌、细菌，还可以是人等；在基因工程中获取目的基因以及将目的基因和载体结合构成基因表达载体必须使用同一种限制酶进行切割，已获得相同的黏性末端，再在DNA连接酶的作用下，将目的基因和载体连接，构成基因表达载体； 人的胰岛素基因可以在大肠杆菌体内得以表达，但是由于大肠杆菌是原核生物，没有内质网、高尔基体等细胞器的加工，合成的胰岛素原不具有胰岛素的功能，即没有生物活性；作为标记基因，有利于重组基因在细胞内表达的鉴定筛选，但对于目的基因的表达没有促进等调控作用。 答案：D 二、基因工程的基本操作程序 1．构建基因表达载体(核心步骤) 2．将目的基因导入受体细胞 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法 显微注射技术 Ca2＋处理法 受体细胞 体细胞(或受精卵) 受精卵 原核细胞 转化过程 将目的基因插入Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA→表达 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 【特别提醒】①只有第三步将目的基因导入受体细胞不需碱基互补配对，其余三个步骤都涉及碱基互补配对。②工具酶只有两种：限制酶在操作程序1、2中用到且要求用同一种，目的是产生相同的黏性末端；DNA连接酶只在操作程序2中用到。 ③目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化。转化的实质是目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。 2．下列关于基因表达载体构建的相关叙述，不正确的是(　　) A．需要限制酶和DNA连接酶 B．必须在细胞内进行 C．抗生素抗性基因可作为标记基因 D．启动子位于目的基因的上游 解析：基因表达载体是目的基因与载体的结合，在此过程中需用同一种限制酶切割目的基因与载体，用DNA连接酶将相同的末端连接起来；基因表达载体的构建是在细胞外进行的；基因表达载体包括启动子(位于基因上游使转录开始)、终止子、目的基因和标记基因。 答案：B 三、基因工程的应用 1．乳腺生物反应器与细菌生产的比较 　类型 项目　　 乳腺生物反应器 细菌生产 基因结构 动物基因结构与人类基因结构相同 与人类基因结构不同 基因表达 与天然蛋白质活性没有区别 由于缺少内质网、高尔基体等细胞器，产物可能不具有生物活性 产物提取 从乳汁中较易分离提取 从细胞中提取，较为复杂 生产设备 畜牧业生产，加提取设备 工业生产，