温阳解郁方对母婴分离小鼠行为模式及HPA+轴功能的影响.pdfVIP

[4] 持续时间与成人抑郁症的发生呈正相关 。中医理论分析学认为早年不良经历与阳气受 损有关，这与肝气郁滞是抑郁症主要病机的传统认识有很大分歧。前期研究显示在解郁 [5] 名方逍遥散的基础上加上二仙汤（仙茅、淫羊藿等）对抑郁症模型小鼠亦有很好疗效 ， 提示温阳解郁复方可改善与抑郁症发病相关的病理机制。 材料与方法 1 母婴分离 选用大于12w以上的C57BL/6J雌鼠按雌:雄=4:1雌雄混居。在孕鼠待产前单笼饲养， 更换垫料。分娩后每窝仔鼠保持在5～8只，以小鼠出生作为0天（P0），分别于 P1～P10 进行母婴分离，3h/d。分离时先将母鼠移出，再将幼鼠移至孵育箱中（30-32℃）；母婴 分离结束后，先将幼鼠移回窝内，然后移回母鼠。对照组的幼鼠每天也按上述过程处理 一下，分离时间小于 10min。母鼠生仔后喂以繁殖营养饲料，直至 P21 小鼠断乳，断乳 后普通饲料喂养。 2 分组及处理 选用 12-20w，体重24-30g 的C57BL/6J 雄性小鼠进入实验。先将经过母婴分离的小 鼠分为母婴分离组（MS ）、燮神方治疗组（XSF ）和氟西汀治疗组 （Fluoxetine ）；再将 体重及月龄相当、未经过母婴分离的小鼠作为正常对照组（Control ）。行为学检测每组 12 只，血清皮质酮检测每组 20 只，免疫组织化学检测每组 5 只。XSF 和 Fluoxetine 小 鼠从实验第 1 天起分别灌服燮神方混悬液 （5.25g/kg ）和氟西汀混悬液(20mg/kg)，Control 和 MS 灌服蒸馏水，共治疗 4w 。 3 中药及试剂 燮神方的方剂组成为柴胡 15g，白芍 15g，当归 15g，白术 15g，茯苓 15g，炙甘草 7.5g，薄荷2g，郁金15g，连翘15g，白芥子10g，三棱10g，巴戟15g，上方药物均购 自同仁堂药，常规煎煮水提，低温真空干燥成干浸膏，粉碎。使用时将中药浸膏粉末按 比例混于蒸馏水中备用；百忧解胶囊（含氟西汀 20mg/粒）为礼来公司生产；地塞米松 注射剂由四川迪康药业公司生产，促肾上腺素释放激素（CRH）及 DAB 为 Sigma 公司产 品，小鼠皮质酮（CORT）放射免疫检测试剂盒为美国DSL公司产品，糖皮质激素受体 （GR） 抗体（M-20）为Santa Cruz公司产品，绵羊来源11β-羟基类固醇脱氢酶2（11β-HSD2 ） 抗体为 Chemicon 公司产品，Elite ABC 试剂盒及生物素化的免抗绵羊抗体均为 Vector 产品，行为为分析软件 Ethovision3.0 为荷兰 Noldus 公司产品。 4 行为学检测 行为学检测均在治疗4w后即开始进行，具体如下： 旷场实验 行为学检测在受到CD-1小鼠攻击2h后进行，将小鼠轻轻放入旷场箱 （40 ×40×35cm）中央，实验在强光、白噪声下进行，观察5min。以旷场箱中心点为中心的 20×20 cm 为中央区（Central Zone），计算小鼠 5min 运动总长度（Total Distance Traveled, cm），中央区进入次数(Central Zone entries)。 高架十字迷宫实验 高架十字迷宫 （elevated plus maze, EPM）由开放臂（30×5cm）， 闭合臂（30×5×15cm）和两臂汇合的中央区（5×5cm）组成，距地面 50cm。将小鼠放 至两臂交汇中央，面对闭合臂，实验在暗光、白噪声下进行，观察5min，用Ethovision3.0 计算小鼠开放臂进入次数（Open Arms Entries），开放臂停留时间(Time in Open Arms, sec)，闭合臂进入次数（Closed Arms Entries），闭合臂停留时间(Time in Closed Arms, sec)。 趋向决择行为实验 实验采用自制的 T 型迷宫，其有两个臂支（30cm×10cm× 30cm）、一个干支（30cm×10cm×30cm）和干支末端的箱体（25cm×25cm×30cm）组成， 干支由可拆卸的桥板和其下水槽组成；实验前，每天在食物中加少量巧克力，使小鼠熟 悉其味道。于实验开始前 1d 至实验结束，限食（2g/