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第二节基因工程的基本操作步骤 基因工程的核心： 让目的基因在宿主细胞中稳定存在和高效的表达 二、基因工程的理论基础 DNA的结构相同（双螺旋结构） DNA功能相同（即复制方式和表达机制相同） 整个生物界共用一套密码子 * 看视频总结基因工程需要哪些步骤？ 获得目的基因 形成重组DNA分子 将重组DNA分子导入受体细胞 筛选含有目的基因的受体细胞 目的基因的表达 基因工程基本操作步骤 一、获得目的基因 1、目的基因较小且序列已知——用化学方法直接人工合成。 2、目的基因的全部或部分序列已知——用聚合酶链式反应（简称PCR）技术扩增 3、目的基因的序列是未知的——从基因文库中获取目的基因 ②用某种限制酶切成多个片段 ①提取某种生物的DNA 第一步：建立基因文库（一般已做好） ③将片段与载体连接起来 ④导入受体菌（常用大肠杆菌）群体中 基因文库 第二步：从基因文库中获取目的基因 ⑤根据目的基因的产物等特性，用原限制酶将目的基因切下。 ①用与切下目的基因的同种限制酶切开载体DNA 二、形成重组DNA分子 ②用DNA连接酶连接目的基因和载体DNA，形成重组DNA分子。（重组质粒或重组病毒） 三、将重组DNA分子导入受体细胞 构建重组质粒 四、筛选含有目的基因的受体细胞 在含有四环素的选择培养基上培养 目的基因 抗四环素基因 导入 只有含重组DNA分子的细胞能生长 抗四环 素基因 抗氨苄青霉素基因 与目的基因两侧 相同的酶切位点 含目的基因 含四环素的培养基 含氨苄青霉素的培养基 含目的基因 五、目的基因的表达 受体细胞是原核细胞时，目的基因可留在质粒上； 受体细胞是真核细胞时，目的基因必须插入染色体DNA。 ①检测目的基因是否插入了受体细胞染色体DNA中——DNA分子杂交技术 将DNA固定在膜上，加热解旋 将带有放射性同位素标记的含目的基因的DNA片段（探针，一般为单链）加到膜上 提取受体细胞基因组DNA 一段时间后冲洗 检测膜上是否有杂交带（放射性） ②检测目的基因是否转录——分子杂交技术 固定在膜上的变成mRNA，探针与①相同 ③检测目的基因是否翻译成蛋白质——抗原-抗体杂交 ④检测生物个体是否出现相应性状 活动：完成“基因工程操作程序的模拟操作” 思考： 基因工程的理论基础是什么？ 原核生物界 原生生物界 植物界 动物界 真菌界 DNA的结构和功能 转录 翻译 遗传信息的表达机制相同 整个生物界共用一套密码子 哪些技术能保证基因工程能够实施？ 获得目的基因 形成重组DNA分子 将重组DNA分子导入受体细胞 筛选含有目的基因的受体细胞 目的基因的表达 工具? 限制酶 DNA连接酶 载体:质粒、病毒 * * * 胰岛素由51个氨基酸组成 当 想一想，为什么同种？