免疫比浊法.pptVIP

免 疫 系 实验 免疫比浊法检 测免疫球蛋白 1 2 材 料 和 方 法 3 实 验 结 果 实 验 原 理 实验原理 免疫球蛋白（Ig）是指一类具有抗体样结构或具有抗体活性的球蛋白，能与诱导其产生的抗原发生特异性结合，是体液免疫应答的主要效应分子。免疫球蛋白水平增高常见于各种慢性细菌感染，如慢性骨髓炎、慢性肺脓肿等。在多种自身免疫病、肝脏疾病患者中可有IgG、IgA、IgM升高：在系统性红斑狼疮患者中以IgG、IgA或IgG 、IgM升高较多见；在类风湿关节炎中则以IgM升高为主。免疫球蛋白水平降低多见于先天性体液免疫缺乏病、肾病综合症、吸收不良综合症、淋巴瘤、放射损伤和免疫抑制剂治疗后等情况。 实验原理 血浆蛋白分析技术经历了： 试管沉淀反应、琼脂凝胶的扩散实验发展到现代免疫分析技术，其中很重要得一类就是免疫比浊法。 实验原理 抗体（Ab）与可溶性抗原（Ag）反应，形成一定结构的免疫 复合物，在PEG作用下，成为悬浮于反应溶液中的微粒，使样品浊 度发生变化。在沉淀反应中形成的复合物微粒具有特殊的光学性质， 当一定波长光线通过浊度发生变化的反应混合物时，由于被不溶性 免疫复合物吸收而减弱，故在一定范围内吸光度与免疫复合物量呈 正相关。当抗体浓度固定时，样品的浊度与其中所含抗原量成正比。 实验原理 聚乙二醇即PEG是中性、无毒且具有独特理化性质和良好的生物相溶性的高分子聚合物，聚乙二醇具有高度的亲水性，在水溶液中有较大的水动力学体积，并且没有免疫原性。 在免疫反应中，为增强抗原抗体反应常使用增聚剂，如3-4％的聚乙二醇等，利用其破坏抗原抗体的水化层，促进其靠近反应，但如浓度不适合，高了会影响其它溶质或产生非特异性聚集影响结果。 优点  稳定性好，敏感性高(达ng/L)、精确度高，干扰因素少，结果判断更加客观、准确。 快速、简便，结果回报时间短，便于及时将各种信息向临床反馈，又可节约大量人力物力，利于大批量样品的处理。 能更好地避免标本之间的污染及标本对人的污染。 可利用多道计数器、测光仪，同一份样品同时测定几十种和临床有关的分析项目，血清用量少，具有明显的应用优势。 免疫比浊法的特点： 实验原理 缺点 当抗体或抗原大量过剩时，出现可溶性的复合物，造成误差。 应维持反应管中的抗体蛋白量始终过剩，此值要预先测定。 受血脂浓度影响。脂蛋白的小颗粒可形成浊度，造成假性升高。 少量小抗原抗体复合物极难形成浊度，除非放置较长时间 。 如要形成较大的的复合物，抗原抗体量应较大。 实验原理 免疫比浊法的特点： 实验材料 1.免疫球蛋白A,M,G（IgA, IgM, IgG）测定试剂 2.免疫球蛋白A,M,G （IgA, IgM, IgG）校准品，蒸馏水， 血清样本 3.微量加样枪、试管 4.分光光度仪、水浴箱 实验方法 空白管 校准管 样本管 +蒸馏水 （10mL） +校准品 （10mL） +样品血清 （10mL） OD340 +IgX试剂 （1mL） 37℃ 5min 37℃,10min 混匀 Ig浓度（g/L）= × Ig校准浓度（g/L） 样本管吸光度 校准管吸光度 结果计算方法： 实验结果 IgA：1.72 g/L IgG：9.77 g/L IgM：1.37g/L 免 疫 系