CD式微流控芯片用于苯丙酮尿症基因筛查.pdfVIP

2010年微纳尺度分离和分析技术学术会议暨第六届全国微全分析学术会议 CD 式微流控芯片用于苯丙酮尿症基因筛查 1 2 1 1 1 1* 陈 斌 ，李春宇 ，邹 晓 ，雷秀霞 ，刘大渔 ，周小棉 1．广州医学院附属广州市第一人民医院临床化学技术研究室，广州，510180 2.中国科学院大连化学物理研究所，大连，116023 苯丙酮尿症（phenylketonuria, PKU ）是一种氨基酸代谢异常的常染色体隐性遗传病，主 要是由于苯丙氨酸羟化酶（phenylalanine hydroxylase, PAH ）基因突变导致肝脏苯丙氨酸羟 化酶缺乏所致。早期诊断、早期治疗是决定 PKU 预后的关键，因此产前及新生儿 PKU 筛查 具有重要意义。随着分子生物学的发展，基因诊断成为实现 PKU 早期诊断的有效手段。DNA 杂交技术被广泛应用于 PAH 基因突变检测，但其存在检测时间较长、耗样量大等缺点。为 解决这个问题，本研究发展了一种用于人苯丙氨酸羟化酶基因突变检测的 CD 式微流控芯 片。这种微流控芯片采用聚二甲基硅氧烷（PDMS ）－玻璃双层结构。PDMS 层构成 12 个 杂交微通道，玻璃层标记水凝胶结合探针区。探针区分别标记 R243Q 、V245V 和空白对照。 a b 空白对照 V245V R243Q 样本1 样本2 样本3 样本4 图1 芯片示意图与检测结果 （a） 芯片结构示意图；（b） 芯片杂交荧光信号检测：样本1含V245V 和R243Q突变，样本2含R243Q 突变，样本3 含V245V突变，样本4为阴性对照。 将苯丙氨酸羟化酶基因外显子 7 扩增产物与杂交缓冲液混合后加入芯片的进样孔，由离 心力驱动进入杂交通道区。然后由离心机控制芯片旋转或暂停，芯片微通道内溶液由于离心 通讯作者：周小棉 广州医学院附属广州市第一人民医院临床化学技术研究室 Email: zhouximi@ 2010年微纳尺度分离和分析技术学术会议暨第六届全国微全分析学术会议 力与毛细管作用力形成往复流动，从而增加扩增产物与水凝胶点上的探针接触的几率，增加 DNA 杂交几率，最终达到快速杂交的目的。使用该 CD 式微流控芯片仅需离心机操控，无 需泵阀装置，而且操作简单。样品消耗只需 1 μl，杂交时间缩短至 15 min。本论文建立了基 于离心力驱动的 CD 式微流控芯片人苯丙氨酸羟化酶基因突变检测的方法，该方法简便、快 速、高灵敏，可以苯丙酮尿症产前筛查。 参考文献 [1] Eisensmith, R.C., Woo, S.L., Hum Mutat. 1992, 1, 13-23. [2] Kim, J.H.S., Marafie, A., Jia, X.Y., Zoval, J.V., Madou, M.J., Sens Actuators B Chem. 2006, 113, 281-289 [3] Li, C., Dong, X., Qin, J., Lin, B., Anal Chim Acta. 2009, 640, 93-99. [4] Li, C., Li, H., Qi