Rv2653c在大肠杆菌中克隆与表达与研究.pdfVIP

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牛 中国防痨协会~ JL004 Rv2653c在大肠杆菌中的克隆与表达研究 李邦印孙卫国程小星孙昌文熊志红王仲元王金河苏锐 (解放军第309医院结核病研究室北京100091) 摘要:目的从H37Rv标准株克隆出结核菌Rv2653c基因并进行表达与初步分析。方法: 阳性克隆进行测序,将正确编码基因克隆到pET24b载体上,在BL21大肠杆菌菌株中以IPTG 诱导表达重组蛋白。以金属螫合层析初步分离纯化重组蛋白,采用westernblot方法对重 组抗原进行抗原性初步分析。结果首先获得了重组的Rv2653c编码的蛋白,表达产率不低 于20%,初步纯化纯度约90%,以人血清进行的westernblot分析发现,Rv2653c重组蛋白 有较好的抗原性。结论获得了Rv2653c重组蛋白为进一步寻探讨其功能及应用价值奠定基 础。 关键词:结核分枝杆菌;大肠杆菌;克隆;表达 通讯作者:程小星(xc36cn@163.corn) and of Rv2653cof11.TBinE.coli Clongingexpression gene L1Bangyin,Sun Weiguo,ChengXiaoxing,SunChangwen,XiongZhihong,Wang Rui Zhongyuan,WangJibe,Su 劢e309 Hospital只Z.4 Beijin9100091,China To the of Abstract:Objectivestudy and Rv2653c expressionpurification of tuberculosisinE.coli.MethodsRv2653c proteinMycobacterium expressed genes were ified chainreactionfrom of ampl bypolymerase genomeMycobacterium tuberculosisH37Rv,andfirstclonedintovector the was pG酬7.Aftersequence confirmed,thewassubclonedto Rv2653c was gene pET24b.Recombinantproteingot and ofthefused was byexpressionpurification.Theantigenicity proteinanalyzed Western-blot.ResultsDNA of ident wi The Rv2653cwere icalththat by sequences byGenBank.Therelativemolecularmassofthe wasabout14kD published

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