2015 全ゲノム連鎖解析法による疾患感受性遺伝子座の検索.pdf

筑波大学技術報告 24: 53-56, 2004 全ゲノム連鎖解析法による疾患感受性遺伝子座の検索 1 2 伊藤清子 、有波忠雄 1 2 筑波大学人間総合等教育研究支援室（医学系）、 筑波大学基礎医学系 〒305-8575 茨城県つくば市天王台 1-1-1 概要 3.2.1 DNA の抽出 全ゲノム連鎖解析法は、多因子疾患の原因遺伝子 EDTA 加採血を行った静脈血 10 ml を2,000 rpm で 座や感受性遺伝子座を全染色体上にくまなく検索す 10 分遠心後、血漿成分と血球成分に分離し、Kunkel [2] る方法である。多因子疾患は、複数の遺伝因子と環 らの方法 に従い、この血球成分から高分子のDNA 境因子の影響により発症する。多因子疾患である小 を抽出した。遠心分離して得られた血球成分を９倍 児気管支喘息の感受性遺伝子座の検索を目的として、 量の抽出液 (0.32 M sucrose 、5 mM MgCl2 、1% 染色体全域に存在するマイクロサテライト (MS) マ TritonX-100、10mM Tris-HCL、pH7.6) にて希釈後、 ーカーを約 10 cM 間隔で選択し、疾患との連鎖の有 3,000 rpm で 15 分遠心して核分画を得た。この核分 無を調べた。連鎖の統計解析には、ノンパラメトリ 画を 3 ml のproteinase K 用緩衝液 (10 mM Tris-HCL、 ック法の一つである罹患同胞対法を用いた。その結 10 mM EDTA、10 mM NaCl、pH 8.0) に浮遊させた後、 果、第 4 染色体 (4q35)、第 5 染色体 (5q31-33)、第 6 最終濃度 0.5 % になるように SDS を加えて核膜を 染色体 (6p22-21.3)、第 12 染色体 (12q14-24.2) と第 破壊した。次に、0.6 mg のproteinase K を加え、37 °C 13 染色体 (13q14-14.3) のそれぞれの領域に小児気 で一晩反応させてタンパク質成分を分解した。さら 管支喘息との連鎖が見られ、この領域が感受性遺伝 にPhenol 処理による除タンパク後、透析液（10 mM 子座である可能性が示唆された[1]。 Tris-HCL、1 mM EDTA、pH 8.0）に透析し Phenol を 完全に除いた。次に、RNase を最終濃度 100 µg/ml に １．はじめに なるように加え、37 °C で 1 時間反応させて RNA を 分解した。さらに proteinase K 反応、Phenol 処理、 近年、多くの疾患感受性遺伝子が、分子遺伝学的 透析を繰り返した。 手法の発達とヒトゲノムプロジェクトの進行により 抽出した DNA は分光光度計で測定し、 明らかになってきている。 1OD =0.055