测定人血清中甲胎蛋白的化学发光免疫分析新方法.pdfVIP

第十届全国有机分析学术研讨会 熊人趣澶中甲胎蛋白的化学发光免疫分析新方法 王琼娥 庄惠生 陈国南 张帆 (福州大学化学系．福州350002) ’关曩诃化学发光免疫分析 甲胎蛋白 异硫氰酸异鲁米诺 用自翻的化学发光标记新试搠异硫氟酸异鲁米诺(简称ITCI)标记A髓抗体，用双抗夹心化学发光免 ng／mL，线性范围1．5～150ng／mL，与放射免疫法比较， 疫分析法测定人血清中AFP，检测限达0．5 相关性良好。 中的AFP不超过20 ng／=L。当机体发生肝癌或卵黄柬肿瘤时，血清中AFP含量升高。因此， AFP的测定，在临床疾病诊断中具有特别重要的意义。测定AFP的常规方法有酶免疫法和放 射免疫法¨引。化学发光免疫分析法具有高灵敏度，快速、简便、无放射性污染等优点，越来 发光免疫分析新方法，用自制的化学发光标记新试剂异硫氰酸异鲁米诺(简称ITCI)标记 ng／mL，线性 AFP抗体∥用双抗夹心化学发光免疫分析法测定入血清中AFP，检测限达0．5 ng／盈L，与放射免疫法比较，相关性良好。 、 范围1．5～150 1 实验方法 1．1^FP抗体的标记 mL 0．10 取15 AFP抗体．用0．50pH9．5 mol／L碳酸盐缓冲溶液溶缀，在20～25℃ ng ml1．Omg／mL异硫氰酸异鲁米诺，加毕继续搅拌两小时。经透析过柱， 搅拌下逐滴加入O．45 绘制洗脱曲线，收集高峰管溶液，冷藏备用。 1．2免疫双抗夹心反应 Anti—AFP)，按常规方法进行双抗夹心反应后，将双抗夹心复合物洗脱下来，冷藏备用。 1．3化学发光测定 ml0：010 mol／L 取0．50啊lITCl或待测溶液，加入0．20 NaOH溶液，混合均匀后置‘t ml 暗室，打开记录仪和光门，注射0．25 l【lFe(cN)。浓度为0．0010 或AFP。 2结果与讨论 2．1标记^阡抗体的标记率 经多次试验，结果表明标记AFP抗体的标记率可达0．21～0．75，平均为0．40。 ‘ 2．2双抗夹心免疫反应条件的优化 ‘ D21 ，。dt■■■-■垂垂《女i雩 第{+届伞f司仃机分析学术研讨会 6 10 rain，洗脱双抗夹 mn，舣抗夹心反应时间：勺140 m(Il／L：抗体抗原反应时间为120 rain。 心复合物时间为70 2．3化学发光测定条件优化 4～0．010 NaOH浓度在1．0：10 mol／L范围，随着NaOH浓度增加，发光慢度明显增人， mol／L时， 当NaOH浓度为I)．010mol／L时，发光强度达最人，NaOH浓度为0．0050～0．050 发光强度变化较小，NaoH浓度人『．0．050mol／L，发光强度略有降低。实验时，反麻池中加 入0．20ml0．010mol／L