模拟微重力对辐照细胞DNA损伤修复的影响.pdfVIP

T a1．RoleofCD4CD25FOXP3Cellsin WJ，Lee SE，et Regulatory 【6】Yun DW，Chang 1 Psoriasis[J]．AnnDermatol，200，22(4)：397-403． is P，RenandA，BruneauJ，Mendes—da-CruzDA，et notamarker [7】Milpied a1．Neuropilin—I of J 466—71． human EurImmun01．2009 Foxp3+Treg Jun；39(6)：1 模拟徽重力对辐照细胞DNA损伤修复的影响 窒麴越千玉兰杭海英 中国科学皖生物物理研究昕系统中心。生物大分子国家重点实验室 北京市甥黩|区人屯路15号，邮编：100101 目的：由于没有地球大气层的保护，宇航员在太空中遭受到的辐射远高于地球表面。辐 射会对人体造成多种损伤，最为突出的是对遗传物质DNA(基因组)的破坏及由此引 起组织、器官和系统的病理状态，包括神经系统、免疫系统和胃肠道系统的损伤和功能 丧失，长期效应包括癌症的发生。太空中除辐射外，还存在微重力等其它特殊因素。地 基进行的微重力模拟实验研究发现，微重力会增加人淋巴细胞基因组不稳定性1。微重 力和辐射对基因组稳定性的协同效应也是一个十分重要的问题，已有报导微重力会增加 辐射导致的淋巴细胞致死和致突变效应，并减慢辐照后的DNA损伤修复z3，但以上相 关研究主要集中于淋巴细胞，对其他类型哺乳动物细胞鲜有报导，在淋巴细胞上观察到 的这种效应是否具有普遍意义或是淋巴细胞特有的应答还不得而知，需要全面了解微重 力和辐射对不同类型哺乳动物细胞的基因组稳定性的协同效应，这将为载人航天中宇航 员的辐射危害评估提供极有价值的基础数据。故本研究拟利用地面模拟微重力装置研究 模拟微重力对辐照后小鼠胚胎干细胞DNA损伤修复的影响及其他相关生物学效应的影 响。 方法：1)小鼠胚胎干细胞模拟微重力处理：小鼠胚胎干细胞接种于培养瓶中，在正常 培养条件下培养18hr使其贴壁后，在培养瓶中灌满培养液，细胞随机分成两组，实验 组置于微重力模拟装置双轴回转器中(中国科学院空间科学与应用研究中心研制)，对 ．108- 照组置于双轴回转器外正常重力环境中，整个系统置于37度恒温箱内。2)细胞DNA 损伤检测：对照组和实验组分别在模拟微重力处理后2d收细胞，用碱性彗星电泳方法 检测细胞DNA损伤；小鼠胚胎干细胞用8Gyy-rays辐照后立即进行模拟微重力处理， 链断裂。3)细胞扩增检测：小鼠胚胎干细胞按每瓶104细胞接种，对照组和实验组分别 在模拟微重力处理后ld，2d，3d，4d和5d收细胞，用细胞计数板进行细胞计数。4) 细胞周期检测：小鼠胚胎干细胞按每瓶5*205细胞接种，对照组和实验组分别在模拟微 仪检测细胞周期分椎。5)细胞凋亡检测：对照组和实验组分别在模拟微重力处理后ld 小鼠胚胎干细胞按每瓶1事105细胞接种，对照组和实验组分别在模拟微重力处理后2hr， 胞计数板进行细胞计数。贴壁率=贴壁细胞数／(贴壁细胞数+悬浮细胞数) 结果：1)碱性彗星电泳结果发现，模拟微重力处理后2d，对照组和实验组DNA损伤 程度无显著区别(图1A)，提示模拟微重力本身并不会导致小鼠胚胎干细胞DNA损伤； 小鼠胚胎干细胞受8Gy丫．rays辐照后，用中性彗星电泳检测对照组和实验组DNA双链 度逐渐降低，提示DNA损伤逐渐修复；模拟微重力处理lhr后，实验组DNA双链断裂 程度显著高于对