Akt／GSK-3β介导高糖上调肾小管上皮细胞Snaill的表达.pdfVIP

· 2222· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2012，28(12)：2222—2226 [文章编号] 1000—4718(2012)12—2222—05 Akt／GSK一3I3；介导高糖上调肾小管 上皮细胞 Snaill的表达 余 红，石明隽， 肖 瑛， 刘瑞霞， 王圆圆， 郭 兵， 张国忠 (贵阳医学院病理生理学教研室，贵州 贵阳550004) [摘 要] 目的：观察高糖对原代肾小管上皮细胞Snaill和蛋白激酶B／糖原合成酶激酶3p(Akt／GSK一3B) 信号通路的影响，探讨糖尿病肾病时Snail1表达的调节机制。方法：原代培养大鼠肾小管上皮细胞(RTECs)，随机 分为正常糖对照组、高渗组和高糖组。Westernblotting检测不同处理组RTECs不同培养时点(30min、2h、12h、24 h、48h和72h)Snail1、Aktl、GSK一3B、磷酸化 Akt(P—Akt，Ser473)和磷酸化 GSK一3p(P—GSK一331，Set9)蛋白的 水平。RT—PCR检测 Snaill、Aktl和 GSK331mRNA的表达。RTECs以磷脂酰肌醇 3一激酶 (PI3K)抑制剂 LY294002(25i~mol／L)预处理50min，再与高糖共同培养 24h，Western blotting检测上述指标蛋白的表达。结果： 与正常糖对照组比较，高糖组RTECsSnaill和Aktl蛋白和mRNA的表达上调 ，P—Akt及 P—GSK一3B蛋白表达增 加，但总GSK一3B蛋白和mRNA表达无变化。以LY294002处理后，高糖组RTECsSnaill、P—Akt及 P—GSK一331 蛋白表达水平较未处理高糖组明显下降，但LY294002不影响总Aktl和GSK一3p蛋白表达。结论：Akt／GSK一3B 可能介导了高糖诱导的RTECs锌指转录因子Snaill的表达上调。 [关键词] Snaill蛋白；蛋白激酶B；糖原合成酶激酶3B；糖尿病肾病；大鼠 [中图分类号】 R363 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．12．020 Up —-regulation ofSnaill expression in renaltubular epithelialcells throughAkt／GSK-38pathwayunderhigh--glucosecondition YUHong，SHIMing-jun，XIAOYing，UURui—xia，WANGYuan—yuan，GUOBing， ZHANG Guo—zhong (DepartmentofPathophysiology，GuiyangMedicalCol~ge，Guiyang550004，China．E—mail：zgzl07@163．corn) [ABSTRACT] AIM ：Toexaminetheeffectsofhighglucose(HG)ontheexpressionofSnaillandproteinkinase B(Akt)／glycogensynthasekinase3p(GSK一3p)inprimaryrenaltubularepithelialcells(RTECs)．METHODS：The primaryRTECswerernadomlytreatedwihtnormalglucose．highglucoseorD—mannitolfor30min一72h．RT—PCRand Western blottingwereusedtoobservehteexpressionofSnaill，AktnadGSK一38atmRNAnadproteinlevelsinhtese cells．TheprimaryculturedRTECswerepretreatedwithLY294002(aPI3Kinhibitor，25p~mol／L)toobservethespecific inhibitor