ATPase抑制因子1是与HCMV+pUL23蛋白相作用的宿主蛋白分子-酵母双杂交技术筛选与鉴定.pdfVIP

· 1360· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 20o9，25(7)：l36o一1364 [文章编号】 1000—4718(2009)07—1360—05 ATPase抑制因子 1是与 HCMVpUL23蛋 白相作用的 宿主蛋白分子 一酵母双杂交技术筛选与鉴定 曾 涛，李实骞，姚伙旺， 邹 奕， 周天鸿 ， 李弘剑 (暨南大学生命科学技术学院，生物工程学系，广东 广州510632) [摘 要] 目的：利用酵母双杂交技术筛选与人巨细胞病毒相互作用的宿主蛋白分子，为探讨人巨细胞病毒 pUL23蛋白在HCMV生活周期中的作用机制提供依据。方法：利用 GAL4酵母双杂交系统筛选人胚肾cDNA文 库，以获得与人巨细胞病毒pUL23蛋白相互作用的宿主蛋白分子，再通过回交试验和体外GST—pulldown试验验证 两者之间的相互作用。结果：酵母双杂交筛选得到宿主蛋白分子ATPaseinhibitoryfactor1(ATIF1)，回交试验和体 外 GST—pulldown试验再次确认 ATIF1能够与人 巨细胞病毒 pUL23蛋白相互作用。结论：pUL23确实能够与 ATIF1相互作用，它们之间的相互作用可能为研究pUL23在病毒生活周期发挥的功能提供依据。 [关键词] 巨细胞病毒；蛋白质pUL23；酵母双杂交实验；ATP酶抑制因子 1 [中图分类号] Q71 [文献标识码】 A ATPaseinhibitoryfactor1一ahostcellproteinmoleculeinteractingwith humancytomegaloviruspUL23protein ZENGTao，LIShi—qian，YAOHuo—wang，ZOUYi，ZHOUTian—hong，LIHong—jian (Collegeof ScienceandTechnology， 船 University，Guangzhou510632，China．E—mail：tlihj@jnu．edu．en) [ABSTRACT] AIM：pUL23，theproductofhumancytomegalovirus(HCMV)geneUL23wasidentifiedasoneof tegumentproteins．Theaim ofthisresearchistoinvestigatethefunctionofpUL23duringHCMV lifecycle．M ETHODS： GAIA yeasttwo—-hybridassaywasperformedtoscreenthehumanfetalkidneycDNAlibrarytoobtainhostcellproteinmol-· eculeswhichinteractwithpUL23ofHCMV．ThentheGST—pulldownexperimentwasappliedtoconfirm theproteininter- actionsidentifiedbyyeasttwo—hybrid．RESULTS：ATPaseinhibitory factor1(ATIFI)Was selectedfromhostcellsusing yeasttwo—hybridassay．GST—pulldownexperimentsin 如r0furtherconfirmedtheinteractionbetweenATIFIandpUL23． CONCLUSION：pUL23ofHCMVcaninteractwithATIF1inhostcell，whichmayprovidetheevidenceforunderstanding thefunctionofpUL23inthelifecycleofHCMV． [KEYWORDS] Cytomegalovirus；ProteinpUL23；Yeasttwo—hybridexperiment；ATPaseinhibitoryfactor1 人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus，HCMV) 颗粒中 。所以，对HCMV病毒基因编码产物的功 属疱疹病毒科亚属 (B疱疹病毒)，在全世