Bcl-2表达的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJourn 0flJhoP gy !i!； 二 · 581 · [文章编号] 1000—4718(2010)03—0581一o3 · 短篇论著 · 硫化氢对人 PMN凋亡及 P53／Bcl一2表达的影响木 黄新莉 ， 周晓红 ， 羡晓辉 ， 周君琳 ， 丁春华 ， 范亚敏 ， 凌亦凌 (河北医科大学病理生理教研室，河北 石家庄050017；首都医科大学附属北京朝阳医院骨科，北京 100020) [摘 要] 目的：研究硫化氢 (H：S)对人中性粒细胞 (PMN)凋亡及 P53、Bcl一2表达的影响，以进一步探讨 H，s抗脂多糖性肺损伤作用的机制。方法 ：采用体外分离和培养人血PMN。实验分3组，对照组 ：培养基中加入无 菌生理盐水 10mL／L；脂多糖(LPS)组：培养基中加入 LPS100 L；LPS+硫氢化钠 (NaHS)组：先 LPS前 1h向培 养基中加入(1x10～、lx10 、l×10 )moL／LNaHS。各组于24h后采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的DNA原 位末端标记技术(TUNEL)检测PMN凋亡情况；采用流式细胞术检测PMN中P53及 Bcl一2蛋 白的表达。结果：与 对照组比较 ，LPS组PMN凋亡百分率和DNA断裂百分率均显著减少 (均P0．05)；与LPS组比较，LPS+NaHS(1 ×10 )组PMN凋亡百分率和DNA断裂百分率均有所升高，但无显著差异 (均P0．05)，LPS+NaHS(1×10 ) 组及 LPS+NaHS(1x10。)PMN凋亡百分率和DNA断裂百分率均明显增加，并呈剂量依赖性 (均P0．01)。与 对照组比较，LPS组P53蛋白表达量显著减少(P0．05)；与LPS组比较，LPS+NariS(1×10 )组P53蛋白表达量 无明显变化 (P0．05)，LPS+NaHS(1×10。)组及 LPS+NaHS(1x10 )组P53蛋 白表达量明显增多，并呈剂量 依赖性 (均P0．01)；各组Bcl一2蛋 白表达量无明显变化 (P0．05)。PMN中P53蛋 白表达量与凋亡百分率的相 关分析结果显示二者具有明显正相关关系 (r=0．75，P0．01)。结论：NaHS促进 PMN凋亡的机制可能与其上调 P53蛋 白的表达有关，而与Bcl一2蛋白无关。 [关键词] 硫化氢；中性 白细胞 ；蛋白质P53；蛋白质Bcl一2 [KEYWORDS] Hydrogensulfide；Neutrophils；ProteinP53；ProteinBcl一2 [中图分类号] R363 [文献标识码] A 中性粒细胞 (polymorphonuclearneutrophil，PMN)是革兰 RPMI一1640培养基购于Gibco—BRL，按说明书配制，4℃ 保 氏阴性细菌 内毒素主要成分脂 多糖 (1ip叩olysaccharides， 存；特级胎牛血清购于杭州四季青生物制品公司，使用前56 LPS)致急性肺损伤 (acutelunginjury，ALI)的重要效应细胞。 ℃水浴30min灭活补体后分装，一20qC保存。原位凋亡检 LPS引起PMN在肺内聚集、激活、与内皮细胞黏附并释放氧 测试剂盒购于上海华美生物工程公司。P53及 Bcl一2鼠抗 自由基、蛋白水解酶等，从而导致以肺微管通透性增高为特 人单克隆即用型抗体和羊抗鼠FITC—IgG购于SantaCruz。 征的ALI…。通过促进 PMN凋亡的方式非炎性清除PMN是 人淋巴细胞分离液购于中国医科院血液研究所。 目前临床控制ALI的新观念。P53和Bcl一2蛋 白是重要的 2 方法 凋亡调节蛋 白，硫化氢 (hydrogensulfide，H：S)是继 NO和 CO 2．1 人血PMN体外分离和培养 采用密度梯度离心法分离 PMN。取健康志愿者新鲜肝素抗凝静脉血，用生理盐水等倍 之后的第三种气体信号分子 ，我们最近的实验发现给予大 稀释，缓缓加入预先装有人淋巴细胞分离液的离心管中