RNAi沉默N—cadherin表达对EC9706细胞裸鼠移植瘤生长的影响.pdfVIP

ChineseJournalofPattaophysiology 2011。27(8)：1537—1543 · l537 · [文章编号] 1000—4718(2011)08—1537—07 RNAi沉默N—cadherin表达对 EC9706细胞裸鼠移植瘤生长的影响木 李 克， 刘 莺， 刘文静，侯新芳，何素英， 王居峰 (河南省肿瘤医院肿瘤科 ，河南 郑州 450008) [摘 要] 目的：探讨 RNAi沉默 N—cadherin表达对人食管鳞状细胞癌EC9706细胞体内生物学行为的影 响。方法：通过逆转录病毒介导的RNAi技术将N—cadherin基因的RNA干扰载体pMSCVneo／N—cadhefin质粒及 对照质粒 pEGFP—MSCVnoe质粒分别转染至人食管癌细胞系EC9706，运用 G418进行抗性克隆的筛选和扩增 ，进 而得到稳定转染的人食管癌细胞系EC9706(分别命名为干扰载体组和空载体组)，将正常对照组、空载体组和干扰 载体组EC9706细胞通过皮下注射的方式接种于裸鼠背部肩胛区，比较各组裸鼠成瘤期、成瘤大小、瘤体终重量及 终体积等情况。运用免疫组织化学方法和Westernblotting方法检测3组裸鼠移植瘤组织中E—cadherin、N—cad— herin和MMP一9蛋白的表达情况。TUNEL法检测3组裸 鼠移植瘤组织中细胞的凋亡水平。结果：(1)与正常对 照组和空载体组相 比较，干扰载体组裸鼠移植瘤的生长速率、成瘤大小、瘤体终重量和终体积明显降低 (P0．05)。 (2)与正常对照组和空载体组相比，干扰载体组裸鼠移植瘤组织中N—cadherin和 MMP一9的蛋 白表达均下调(P 0．05)，而 E—cadherin的蛋 白表达则无 明显变化(P0．05)。(3)与正常对照组 (51．554-4．68)和空载体组 (54．17±5．26)相比，干扰载体组(106．81-46．47)裸鼠移植瘤组织中凋亡的阳性细胞数明显增加 (P0．05)。结 论：RNAi沉默N—cadherin表达可明显抑制 EC9706细胞裸 鼠体内移植瘤的生长，其作用机制可能是通过下调 MMP一9的表达，降低细胞对细胞外基质的降解能力，进而降低EC9706细胞的体内侵袭力。RNAi沉默N—cadher- 表达具有体内抑制食管鳞状细胞癌细胞生长的作用。N—cadhefin可望成为抗食管鳞状细胞癌治疗的潜在分子 靶点。 [关键词] 食管肿瘤；RNA干扰 ；神经型钙黏附蛋白；肿瘤侵袭 [中图分类号】 R735．1 [文献标识码】 A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．08．015 EffectofN —cadherinknock—downontumorformationofEC97O6cells in nudem ice LIKe，UUYing，LIUWen-jing，HOUXin—fang，HESu—ying，WANGJu—feng (DepartmentofOncology，ttenanCancerHospital，Zhengzhou450008，China．E—mail： 耐 @yahoo．corn．cn) [ABSTRACT] AIM．．ToexploretheeffectofN—cadherinknock—downonthebiologicalbehaviorofEC9706 ceilsinvivo．M ETHODS：ThecontrolvectorpEGFP—MSCVneoandrecombinantretroviralvectorpMSCVneo／N —cadher- inplasmidsweretrnasfectedintoesophagealsquamouscellcarcinoma(ESCC)celllineEC9706accordingtothemanufac- turer$instructions．StableEC9706 cellcloneswereselectedusingselectionmedium containingG418．Un