雌激素及雌激素受体α减轻谷氨酸对神经细胞的损伤.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，30(1)：121．127 · 121 · [文章编号】 1000-4718(2014)01．0121．07 雌激素及雌激素受体 0减【轻谷氨酸对神经细胞的损伤 朱加应 ， 张广云 ， 王建怡 ， 袁 平 ， 胡 晓 (。贵州省人民医院神经内科，贵州 贵阳550002；临沂市妇幼保健院儿科，山东 临沂 276000； 贵州省人民医院A,JL内科，贵州 贵阳550002) [摘 要] 目的：建立谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型，观察雌激素及雌激素受体 a(estrogenreceptor ， ERa)对谷氨酸诱导的神经细胞损伤的作用。方法 ：原代培养小 鼠大脑皮层神经细胞，神经元特异性烯醇化酶 (neuron—specificenolase，NSE)免疫组化染色鉴定神经元的纯度。建立谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型。用前期 实验中已构建成功的ERa重组慢病毒 (V—ERa—RFP·flag)感染经谷氨酸诱导的神经细胞。实时荧光定量 PCR和 Westernblotting检测ERamRNA和蛋白表达水平。实验分为3组：(1)对照组：用空慢病毒(VRFP—flag)感染经谷 氨酸诱导的神经细胞；(2)雌激素组：用雌激素干预经谷氨酸诱导的神经细胞 ；(3)慢病毒组：用 V．ERa—RFP．flag感 染经谷氨酸诱导的神经细胞。流式细胞术检测各组神经细胞凋亡率；实时荧光定量PCR及免疫荧光染色检测各组 神经细胞中Ⅳ-甲基一D一天冬氨酸受体 1(N-methy1．D-aspartatereceptor1，NMDAR1)及囊泡膜谷氨酸转运体蛋白1 (vesicularglutamatetransporterprotein1，VGLUT1)的变化。结果 ：成功原代培养神经细胞，经NSE免疫组化方法鉴 定神经元纯度大于90％。成功建立经谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型。MOI=7的V—ERa．RFP．flag感染神经细胞 72h后，在荧光显微镜观察下可见到红色荧光表达，与对照病毒相比，能增加神经细胞中ERamRNA和蛋白表达水 平(P0．01)。与对照组相比，雌激素组和慢病毒组细胞凋亡率降低(P0．05)，且实时荧光定量 PeR结果显示， 雌激素组和慢病毒组的NMDARI和 VGLUTImRNA表达降低 (P0．05)，免疫荧光实验结果提示 NMDAR1和 VGLUT1阳性的细胞数减少(P0．叭)。结论：雌激素和ERa能减轻谷氨酸对神经细胞的损伤效应 ，该保护作用 可能通过抑制NMDAR1和VGLUT1的表达来实现。 [关键词] 雌激素 ；雌激素受体仪；谷氨酸；神经元 [中图分类号] R741．05 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000．4718．2014．01．020 Effectsofestrogenandestrogenreceptor0【onneuronalinjuryinducedby t~lutam ate ZHUJia—ying，ZHANG Guang-yun ，WANGJian—yi’，YUANping，HUXiao (DepartmentofNeurology，Gu~houProvincialPeople’sHospital，Guiyang550002，China；DepartmentofPediatrics， MaternalandChildHealthHospitalofUnyiCity，Linyi276000，China；DepartmentofPedaitrics，Gu~houPrvoincailPeo- ple’sHospital，Guiyang550002，China．E—mail：natasan520@163．eom) [ABSTRACT] AIM：Toobservetheeffectsofestrogenandestrogenreceptor (ERa)ontheneuronaldamage inducedbygl