地塞米松对哮喘大鼠嗜酸性粒细胞中p53表达的影响.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPat卫 垫(2；三墨!二坠 · 387 · [文章编号] 1000—4718(2007)02-0387—02 地塞米松对哮喘大鼠嗜酸性粒 细胞 中p53表达的影响木 耿秀娟 ， 孔灵菲， 陆 洋 (中国医科大学附属第一医院呼吸疾病研究所，辽宁沈阳 l10001) 【摘 要】 目的：研究支气管哮喘支气管肺泡灌洗液(BALF)嗜酸性粒细胞中凋亡相关基因p53的表达以及 地塞米松对其的作用及其机制。方法：将 36只大鼠随机分为对照组、哮喘组和激素组，并对其 BALF的嗜酸性粒 细胞进行计数，以免疫印迹法(Westernblotting)检测嗜酸性粒细胞中p53的表达。结果：哮喘组 BALF的 总细胞 数及嗜酸性粒细胞均高于激素组及对照组(P0．01)。哮喘组 BALF的嗜酸性粒细胞中p53表达弱于激素组和对 照组 (P0．01)。结论：哮喘气道炎症与嗜酸性粒细胞生存增加亦即嗜酸细胞凋亡减少密切相关。糖皮质激素可 诱导嗜酸性粒细胞凋亡，其机制可能与促嗜酸性粒细胞凋亡的p53表达有关。 [关键词] 哮喘；嗜酸细胞 ；细胞凋亡；糖皮质激素类；基因，p53 [KEYWORDS] Asthma；Eosinophils；Apoptosis；Glueoeortieoids；Genes，p53 [中图分类号] R363 [文献标识码] A 支气管哮喘是由多种细胞如嗜酸性粒细胞 (eosinophil， 致敏和诱发同哮喘组，然后腹腔注射地塞米松 0．5mg／kg，每 Eos)及肥大细胞反应为主的慢性气道炎症。哮喘的气道炎 天 1次，共5d。对照组：用生理盐水代替卵蛋白致敏，15d后 症 以Eos持续聚集为特征。近年来认为Eos凋亡障碍致 Eos 雾化吸人生理盐水 02 min，每天 1次，共 3d。 生存延长与哮喘炎症相关…。阐明Eos凋亡机制对哮喘的 2．2 样品采集 动物麻醉后行气管插管左肺支气管肺泡灌 防治有重要的理论和实践意义。凋亡相关基因p53是否参与 洗生理盐水 5mL×6，回收BALF，回收率 90％。BALF回收 哮喘Eos凋亡国内未见报道，国外有针对哮喘气道活检标本 液3mL经双层无菌纱布过滤，在 4℃、l200r／min离心 中p53表达 及哮喘患者支气管上皮细胞 p53表达 的报 10min分离细胞。离心沉淀细胞用生理盐水冲洗并调整细 道，因此，Eos中p53表达值得研究。本研究采用卵蛋 白吸人 胞数为 l_0×10’eells／L，在细胞计数板上计数细胞总数。取 诱发大 鼠哮喘模型，应用免疫印迹法 (Western blotting)检测 已调整细胞数的BALF30 ，用特制的细胞涂片离心支架在 BALF的Eos中凋亡基因p53的表达，结合BALF中Eos数量 4℃、l200r／min离心 10min，通过离心作用使一定量细胞均 的变化，探讨细胞凋亡的可能机制，以及地塞米松对其凋亡 匀平铺于载玻片上 ，冷风吹干，经 HE染色后在高倍镜下计数 的影响。以阐明糖皮质激素在哮喘治疗 中的确切机制，为临 100个细胞，同时进行细胞分类计数，每例动物计数 3张涂 床治疗哮喘提供理论依据。 片。左肺上叶注入 4％多聚甲醛 5mL，切下置于4％多聚甲 醛中固定 l周。 材 料 和 方 法 2．3 BALF嗜酸性粒细胞分离 制成密度为 1．090kg／L和 1 主要试剂与设备 1．O8Oks／L的Pereoll液，各2mL先后加入 15mL锥形玻璃试 JSO—OK型超声雾化器 (辽宁省鞍山市电子医疗仪器 管，然后轻轻沿管壁加 回收之余下 BALF于其上，2000r／min 厂)、UNIVERSAL32R离