心肌组织特异性高表达核仁素转基因小鼠的构建与鉴定.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2014，30(7)：1228-1232 【文章编号] 1000-4718(2014)07．1228．05 · 实验技术 · 心肌组织特异性高表达核仁素转 基因小鼠的构建与鉴定 刘艳娟 ， 周 斌 ， 蒋碧梅 ， 童中艺， 孙 丽， 李媛彬， 肖献忠 (中南大学湘雅医学院病理生理教研室，湖南 长沙410078) [摘 要] 目的：构建并鉴定心肌组织特异性高表达核仁素(Ne1)的转基因小鼠，为从整体水平上研究核仁 素对心肌功能的影响及其发挥心肌保护作用的机制提供动物模型。方法：采用基因重组法将小鼠核仁素基因的 全长eDNA插入含心肌细胞特异性启动子的Alpha-MyHCclone26载体，构建 Alpha—MyHCclone26-Ncl重组载体， 通过双酶切及基因测序鉴定其正确性 ；采用PCR鉴定阳性小鼠并用 Westernblotting法观察转基因小鼠中核仁素的 表达情况，采用组织切片及 HE染色法观察转基因小鼠心肌组织形态；测量心脏重量指数和左室压最大上升速率 ， 观察核仁素在心肌组织高表达后对小 鼠心脏形态功能是否有影响。结果：PCR法观察显示获得 4只阳性小 鼠 (5l、52、56和86，其中52和86系繁殖良好)，Westernblotting结果表明转基因小鼠的核仁素表达量明显高于野生 鼠，HE染色等结果表明核仁素对心肌形态学、心脏／体重比值及心功能无明显影响。结论：成功制备了心肌组织 特异性高表达核仁素的转基因小鼠，与野生型小鼠相比，转基因小鼠心肌形态及心功能无明显差异。 [关键词] 核仁素；转基因；心肌；小鼠 [中图分类号】 R363 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2014．07．014 Establishmentand identification ofmyocardium-specificnucleolin trans— gemcmice LIUYan-juan，ZHOUBin，JIANG Bi-mei，TONG Zhong-yi，SUN Li，LIYuan—bin， XIAO Xian．zhong (DepartmentofPathophysiology，XiangyaSchoolofMedicine，CentralSouthUniversity，Changsha410078，China．E— mail：jiangbimei@163．cont) [ABSTRACT] AIM：Toconstructmyoeardium·specificnucleolin(Nc1)transgenicmiceandtoprovideananimal modelforthestudiesofthemyocardialprotectionofnueleolin．M ETHODS：Tocreatenucleolintransgeniemice，amyo· cardium—specificexpressionplasmidofnucleolin(Alpha·MyHCclone26-Nc1)wasconstructed．Thegenetypeoftrnasgenic micewasidentifiedbyPCRandthenucleolinproteinlevelWaStestedbyWestern blotting．Themyocardium morphology， heartweightindex(HWI)nadleftventrieularpressuremaximumriseratewereobservedinnucleolintrnasgenic(TG) miceandwild-type(WT)mice．RESULTS：Wegained4transgenicmice(51，52，56and86l