含VEGF启动子的报告基因的构建和雌激素受体对其活性的影响.pdfVIP

维普资讯 生 物 技 术 通 讯 LETYERS INBIOTECHNOLOGY Vo1．18No．6Nov．，2007 915 文章编号：1009-0002(2007)06-0915-03 研究报告 含VEGF启动子的报告基因的构建及雌激素受体对其活性的影响 熊志红la,lb丁丽华 ，杨树兴 ，孙启鸿 ，杨晓 la袁斌 la韩聚强h，王朝云h，程龙 ，叶棋浓 a 1．军事医学科学院 a．生物工程研究所；b．放射与辐射医学研究所，北京 100850； 2．河北省承德 市双桥 区卫生局 ，河北 承德 067000 [摘要] 目的：构建含血管内皮生长因子(VEGF)基因启动子的荧光素酶报告基因载体，并检测其在雌激素受体作用下的 转录活性。方法：以乳腺癌细胞系MCF-7基因组为模板，扩增VEGF启动子片段，克隆到荧光素酶报告基因载体 pGL3一 basic中。用脂质体介导的基 因瞬时转染法，将重组正确的报告基 因载体转染 293T细胞 ，检测重组质粒 中荧光素酶报告基 因 的表达 。结果 ：酶切鉴定和 DNA序列分析表 明构建 了正确的pGL3一．basic一．VEGF报告基 因载体 ；转录活性实验表 明构建的报 告基 因载体具有启动子活性，雌激素受体et(ERet)能以剂量依赖的方式升高VEGF启动子调控下的报告基 因的转录。结论 ： 克隆了VEGF启动子，为 ERa共调节子的功能研究奠定了基础 。 [关键词] VEGF启动子；荧光素酶报告基因；转录活性；雌激素受体 [中图分类号] Q78 [文献标识码] A The Cloning ofthe VEGF Promoter Reporter and hte EffectofEstrogen Receptor on hte ReporterActivity XIONGZhi-hong1~,DINGI~-hua，YANGShu-xin~,SUNQi一．ho嘭 YANG ∞ YUANBin，HANJu．一qiangI，WANGZhao-yun，CHENG 0n ，YEQi-nong~ 1．BeijingInstituteofBiotechnology，Beijing100850；2．BeijingInstituteofRadiationMedicine，．Beijing100850； 3．ShuangQiaoDistrictHealthBureau，Chengde067000；China [Abstract] Objective：ToconstructtheVEGFpromoter-luciferasereportervectorandstudythepromotertranscriptional activityregulatedbyestrogenreceptor(ER)．Methods：Thepromoterof VEGFwasamplifiedfrom genomicDNA of human breastcancercellline MCF,一7 byPCR and cloned into pGL3一．basic． Th e recombinantplasmid wasdetermined by DNA sequencing and then transfected into 293T cellline by rtansienttransfection． Luciferase reportergene WaSdetected to observepromoterrtanscriptional activiyt． Results． The resultsof restriction enzymedigestion and nucleotide sequencing confimr ed that hte re