针刺诱导c-Fos蛋白在形觉剥夺猫视皮质内表达的研究.pdfVIP

针刺诱导c-Fos蛋白在形觉剥夺猫视皮质内表达 的研究1 严兴科，王富春，王之虹，杨波，高洋 长春中医药大学针灸推拿学院，长春（130117 ） E-mail ：yanxk@126.com 摘 要 目的：探讨针刺后c-Fos蛋白在形觉剥夺性弱视猫视皮质中的表达。方法: 缝合4周龄 幼猫双侧眼睑建立双眼形觉剥夺性弱视模型，形觉剥夺模型组8只，针刺治疗组8只。取材后 对两组视皮质组织进行c - Fos蛋白免疫组化染色，并对染色结果进行计算机图像分析。结果: 弱视针刺组视皮质表达c-Fos蛋白阳性神经元显著多于模型组(P 0.05) 。结论: 针刺能够增 加形觉剥夺后视皮质内c-Fos蛋白表达，提示对视觉系统神经元可塑性变化有调节作用。 关键词：弱视；c-Fos蛋白；针刺疗法 视觉发育敏感期内的视觉可塑性是弱视治疗的基本依据。传统观点认为在视觉发育敏感 期内，年龄越小则视觉可塑性越强，弱视治疗效果越好，成年后则弱视治疗基本无望[ 1 ] 。 弱视的本质是视觉发育紊乱，视觉发育存在敏感期，敏感期过后视觉系统发育成熟，弱视所 引起的视功能损害很难恢复，所以对弱视的早期发现及寻找理想的治疗方法是当今眼科学界 研究的热点。 c -fos 是即刻早基因中的一种，其基础表达水平低但在接受刺激后表达水平可以迅速提 高，根据c -fos 可以被刺激诱导快速短暂表达的特性，其产物c-Fos蛋白可作为视皮质神经元 兴奋的标志，c-Fos蛋白的表达水平反映视皮质神经元发育可塑性的程度[ 2，3 ] 。作者以往的 工作表明，用针刺的方法治疗弱视，安全、简单、实用、疗程短、见效快，能较快地为婴幼 儿所适应，显示了良好的治疗前景。本研究以剥夺性弱视猫为模型，应用免疫组织化学手段， 观察针刺诱导c-Fos蛋白在形觉剥夺性弱视猫视皮质内的表达，探讨视觉发育敏感期弱视幼 猫的视觉可塑性及针刺调节的机理，为临床弱视患者治疗年龄范围的选择提供实验依据。 1 材料和方法 1.1 实验动物选择与分组 4周龄健康幼猫16只（由军事医学科学院实验动物中心提供），雌雄不限。将所有动物 随机分为两组：形觉剥夺性弱视组8只；针刺治疗组8只。 1.2 形觉剥夺性弱视猫模型的建立 满4周龄幼猫在3.5%水合氯醛300 mg/kg腹腔注射麻醉下，自内眦至外眦剪除双侧上下眼 睑睑缘各1 mm组织，上下眼睑创面间断褥式缝合密闭眼睑。术后每天检查眼睑情况2次，发 生伤口感染或缝线抓脱导致眼睑闭合不严密而漏光的幼猫弃用。 1.3 针刺治疗 治疗组于术后第一天开始，以30号、1寸的针灸针进行治疗，参照《实验针灸学》，取 晴明、承泣、球后、攒竹四穴，各穴交替使用。晴明、球后、承泣直刺0.5-0.8寸，攒竹斜刺 0.3-0.5寸，每天1次，10次为1疗程，疗程间隔2天，治疗期为16周。 1本课题得到 2007 年度教育部博士点基金（20070199001 ）和吉林省教育厅科研基金（2006 第 227 号）的资 助。 - 1 - 1.4. 标本获取与制备 将充分麻醉的幼猫头部放在冰盒上，采用断头法从枕寰关节处迅速离断头部，取出全部 脑组织并修至全脑1 /3大小，前至视交叉后止于小脑前端。修块后的脑组织分别经过10%蔗 糖、20%蔗糖、30%蔗糖依次下沉后，冰冻切片6张，切片厚度为10µm，2张HE染色，2张免 疫组化染色。HE染色步骤按常规方法。 1.5 免疫组织化学染色 c-Fos蛋白免疫组化染色采用亲合素-生物素-过氧化物酶法(ABC法) 。SABC ( strep tavidin biotinperoxidae complex)免疫组化试剂盒由展晨公司提供。Ⅰ抗为c- Fos单克隆抗体 (英国ABCAM公司) ，Ⅱ抗为生物素标记山羊抗小鼠IgG，Ⅲ抗为辣根过氧化物酶标记的链 酶卵白素，DAB显色；复染、封片，镜检。