抗8精氨酸一一加压素单克隆抗体的制备和鉴定.pdfVIP

16f4 文章 。 删‘ 一。 ． ， 抗8一精氨酸 一加压素单克隆抗体的制备与鉴定 橱唐斌 ，赵定胜 (航天医学工程研究所，北京 1ooo94) 拽巧。一 _ ● ● - _ _ 一 - - _ _ - _ — 一 关键词：鼍堡量查；2：!堕塾：墨查；!里!堡! 结 果 HPLC：AM 型 ELISA 中图号：R392．11 文献标识码 ：B 2．1 免疫原的制备 采用 EDC两步法．分别制备 了免疫原 BTG-AVP和固相抗原 OVA．AVP。通过以 迄今，一直未能建立一种切实可行的方法． 下3个方面可以证实：①HPLC测定AVP标准曲 测定微重力状态下血及体液中8．精氨酸 ．加压素 线和联结结果 ：根据方程 Y=0．6265+2．7645X； (AVP)的变化，因而不能对应激过程中AVP的生 ，=0．982．求得该反应的联结效率为95．2％，AVP 理或病理作用进行客观地研究和评估。AVP是宇 占总结合物的19．2％，即每个BTG分子可结合 147 航飞行的一个重要生理参数 ，尤其在失重状态 个AVP半抗原分子。②与载体蛋白的交叉反应：分 下，由于体液的再分配可引起身体脱水 “】。为减少 别用BTG．OVA．酰化BTG．BTG-AVP和OVA．AVP 这种现象的发生，准确测定AVP更为重要。单克 包被酶联反应板 ，做非竞争性间接ELISA测定。 隆抗体(rnAb)不需要特别纯化就能直接进行标记， 结果表明，BTG．OVA及酰化BTG与mAb均投有 而且具有更高的特异性和灵敏度，因而在许多免 特异性反应 ，说明这两种载体蛋白的联结是成功 疫分析实验中很有价值。为此，制备抗 AvPmb 的。③AVP对抗 AVP抗体的抑制反应：在系列稀 的研究成为一个重要 的课题 ，也是本研究的 目 释的AVP抗血清中，加^ 1 的AVP标准品，进 的。 行竞争性间接 ELISA反应，发现AVP对抗AVP抗 体有明显的抑制作用。根据抗AVP抗体的存在． 1 材 料 和 方法 证明载体的联结反应是成功的。 1．1材料 8一精氨酸一加压素、牛 甲状腺球蛋 2．2m^b的制备及其特性鉴定 建立了两株分泌 白、琥珀酸酐和碳二亚胺均为Sigma公司产品。卵 抗AVPmAb的杂交瘤细胞．分别命名为 1GF‘aF。 清 白蛋白为国产分析纯。Balb／e小鼠(体重 18— 和2cnBcm 两株杂交瘤细胞经冻存复苏后，以及 22g)，购于中国科学院遗传所。Sp2／0细胞由中国 经过连续传代培养十几代，仍可稳定分泌 mAb。 农业大学传染病与微生物学教研室实验室提供。 两株mAb的Ig亚类、培养上清及腹水的效价、纯 1．2方法 ①人工抗原和包被抗原的制备：选择 化腹水中IBG的含量和亲和常数等，结果均见表 牛甲状腺球蛋白(BTG)和卵清白蛋白(OVA)作为载 1。抗 AVPmAb的SDS—PAGE分析见图1。 x10 l