西农萨能奶山羊甘油三酯水解酶基因_省略_L_的cDNA克隆和组织表达分析_滕炎玲.pdfVIP

农业生物技术学报，2010 年，第18 卷，第6 期，第1134~1142 页 Journal of Agricultural Biotechnology, 2010, Vol.18, No.6, 1134~1142 研究报告 A Letter 西农萨能奶山羊甘油三酯水解酶基因(ATGL) 的cDNA 克隆与 组织表达分析 * 滕炎玲 罗军 李君 赵旺生 王桢 王维 胡仕良 西北农林科技大学动物科技学院，陕西省农业分子生物学重点实验室，杨凌712100 * 通讯作者，luojun1@ 摘 要 甘油三酯水解酶(adipose triglyceride lipase, ATGL)是水解甘油三酯的关键酶。本研究采用RT-PCR 和RACE 技术，分离并克隆了西农萨能奶山羊 (Capra hircus)ATGL 基因的cDNA 序列，其全长2 074 bp (GenBank 收录号为：GQ918145),包括5UTR 141 bp，CDS 1 461 bp ，和3UTR 472 bp，该基因编码486 个氨基 酸(GenBank 收录号为：ADD25174) 。经氨基酸序列分析发现，山羊与GenBank 中牛(Bos taurus)、大鼠(Rattus norvegicus)、小鼠(Mus musculus)、猪(Sus scrofa)和人(Homo sapiens) 的ATGL 的相似性较高，均在85% 以上。 经蛋白质结构分析表明，其蛋白质的分子量为53 243.4 D，等电点为7.4,具有GXSXG(氨基乙酸-X- 丝氨酸 -X- 氨基乙酸)脂肪酶活性特征结构和Patatin 结构域及α/ β 水解酶折叠域,在N 端存在跨膜螺旋结构，并且 整个序列中不含信号肽。此外，本研究还通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术对ATGL 基因进行了组织表 达分析。结果表明，在所检测的12 个组织或器官中均有ATGL mRNA 存在，其中皮下脂肪组织中表达最丰 富，并且远远高于其它组织或器官，肺、乳腺次之，心脏相对最少。ATGL 基因在奶山羊的乳腺组织中具有较 高的表达水平，为该基因的功能研究提供了实验依据。 关键词 西农萨能奶山羊，甘油三酯水解酶，基因克隆，组织表达 Cloning and Tissue Expression Analys is of Adipose Triglyceride Lipase Gene (ATGL) of Xinong Saanen Dairy Goats Teng Yanling Luo Jun* Li Jun Zhao Wangsheng Wang Zhen Wang Wei Hu Shiliang College of Animal Science and Technology of Northwest Agriculture and Forestry University, Yangling, Shaanxi Provincial Key Laboratory of Agricultural Molecular Biology, Yangling 712100, China * Corresponding author, luojun1@ DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2010.06.016 Abstract Adipose triglyceride lipase (ATGL) is a key enzyme in lipid lipolysis. In this experiment, the whole cDNA length ATGL gene with 2 074 bp (GenBank accession No. GQ918145) was isolated and cloned by RT-PCR and RACE (rapid amplification cDNA ends) from Xinong Saanen dairy goats ( Capra hircus). ATGL gene contains 141 bp 5UTR, 472 bp 3UTR, and 1 461 bp coding sequences (CDS) which encode a protein of 486 amino acid residues (GenBank accession No. ADD25174). AA sequence alignment showed that the AA