尖镰孢菌（Fusarium oxysporum）的快速分子检测.pdfVIP

植物病理学报 ACTAPHYTOPATHOLOGICASINICA 43(3)：318-322(2013) 尖镰孢菌 (Fusarium oxysporum)的快速分子检测 王健生，王佳妹，李 潇，董莎萌，张正光，郑小波 (南京农业大学植物保护学院／农业部作物病虫害监测与防控重点开放实验室，南京 210095) RapidmoleculardetectionofFusarium oxysporum by PCR WANG Jian—sheng，WANG Jia—mei，LIXiao，DONG Suo—meng，ZHANG Zheng-guang，ZHENGXiao—bo (CollegeofPlantProtection／Key LaboratoryofMonitoringandMnaagementofCropDiseasesnadPestInsects，MinistryofAgriculture，NanjingAgricultural University，Nanjing210095，China) Abstract：Basedondifferencesinsterol14cx—demethylase(CYP51C)sequencesofFusarium genus，two primerpairs，C1／C2andC3／C4weresynthesizedrespectivelytoamplifyDNA from Fusarium oxysporum by PCR．Morethan45speciesofFusarium andotherspeciesofpathogenswereusedtotestthespecificityofthe primers；C1／C2amplifiedonlyanunique699bpbandrfom F．oxysporum ．ThedetectionsensitivitywithCI／ C2was100ngforgenomicDNA ofF．oxysporum and100一microconidia／gsoilforthesoilpathogens．Incon— trast，thenestedPCRwithtwopairsofprimers(C3／C4andC1／C2)increaseddetectionsensitivityto1Pgfor genomicDNA ofF．oxysporum and 1-microconidia／gsoilofrthesoilpathogens．AndF．oxysporum couldbe specificallydetectedbyPCR assaywithCI／C2 from diseasedplantsamples． Keywords：Fusarium oxysporum；moleculardetection；PCR；CYP51C 文章编号：0412—0914(2013)03—0318—05 由尖镰孢菌 (FusariumoxysporumSchlecht．) 1 材料与方法 引起的大豆枯萎病是危害大豆生产的主要土传病 害…。该菌在土壤和病残体上均可长期生存造成 1．1 供试菌株培养及基因组 DNA提取 危害。快速准确地在发病初期植株和带病土壤 中 供试菌株见表 1。供试菌株在液体完全培养 进行鉴定和检测对防治该病害至关重要。 基 中，25℃振荡培养 4d，过滤收集菌丝 ，采用 甾醇 14 一去 甲基 化酶基 因 (Sterol14a—de— CTAB法 提取基因组 DNA。 methylase，CYP51C)序列在 Fusarium种 内不同菌 1．2 土壤中病原菌 DNA的提取 株间高度保守，种间存在丰富变化，相 比rDNA— 将8Xi0个分生孢子与 lg灭菌土混匀。用 ITS、B—tubulin序列为更好的分子检测靶标 。本 FastDNA~ SPINKITforSoil(MPBio，土壤基因组 研究通过新的分子靶标序列 CYP51C探索尖镰孢 DNA提取试剂盒)提取土壤基因组DNA，将终产物 菌(F．oxyspor