一种适合粉纹夜蛾5IB细胞生长的无血清培养基地的研究.pdfVIP

第 35卷第 2期 华 中师范大学学报 (自然科学版) VoI．35 No．2 2001年 6月 JOURNALOFCENTRALCHINA NORMALUNIVERSITY(Nat．Sci．) Jun．2001 文章编号 ：1000—1190(2001)02—020603 一 种适合粉纹夜蛾5BI细胞生长的 无血清培养基的研究 王新建，余泽华，姚汉超，陈曲侯 (华中师范大学 昆虫学研究所 ．武汉 430079) 摘 要：报道了一种适台粉纹夜蛾(5B1)细胞生长的无血清培养基 (简称为SFM)．该培养基以Tc 一 100基础培养基为基础，补加一定量的水解乳蛋白和酵母抽提物，并加入适量的微量元素、维生 索、脂类复合物等 ，5B1细胞已在该SFM 中传代 18代，研究结果表明：该培养基能支持 5B1细胞 的生长和芹菜夜蛾核型多角体病毒(sfaMNPV)在其中复制． 美键词 ：无血清培养基；芹菜夜蛾核型多角体病毒；粉纹夜蛾细胞系；病毒复制 中图分类号：Q813．1 文献标识码 ：A 目前，昆虫细胞培养一般是在含有 10 ～ 1．4 病毒感染 20 的牛血清培养基中生长 ，由于血清成本高 ，来 病毒株是芹菜夜蛾核型多角体病毒 (Syn 源少．批量闻的质量不稳定 ．重复性差．限制了昆虫 grnphn Ⅱtcifera Mutiple Nuclearpolyhedrosis 细胞大规模培养 的发展及应用，而且血清成份复 virus，sfaMNPV)．病毒感染液是来 自同一批感染 杂 ，是支原体和其它异源病毒污染的重要来源 ，为 SfaMNPV 的5B1细胞的培养上清液，所有细胞用 重组蛋白的下游处理带来了困难 ，发展无血清培养 各 自的培养基稀释成 2×10cells／mI．接种 3mL 基是解决这些困难的关键技术之一．而进 口的无血 于培养瓶 内，在 28℃下培养过夜，然后弃去旧培养 清培养基价格昂贵，不利于国内开展细胞大规模培 基 ，接种 1mL的病毒感染液 (M0I为 2)．在 28c 养工作 ，因此在国内发展无血清培养具有重要的经 下吸附2h．然后除去接种物 ，最后加入 3mL各 自 济意义和理论意义．本文报道一种适台 5B1细胞 的培养基培养 ．每隔 24h收集各 自上清液 ，对胞外 生长的无血清培养基 ，现将初步结果报道如下． 病毒 (ECV)作 TCID。测定 ．感染 3d后 ，细胞 经离心收集 ，细胞沉淀物用 5mL无离子水悬浮， 1 材料和方法 通过超声波处理 ，用血球计数板进行多角体计数． 1．1细胞系以及细胞生长曲线的测定 2 结果 粉纹夜蛾 (7’richoplusiani)卵细胞系克隆株 BTITn一5B1(简称 5B1)，引 自康奈尔大学．细胞生 2．1无血清培养基配方 长曲线 的测定和细胞群体倍增时间的计算按文献 配方经反复摸索试验修正后，能稳定地支持 [1]的方法进行． 5B1细胞 的正常生长和病毒增殖，其成份大致 I．2 基础培养基 如下 ： 配制无血清培养基的基础培养基为 TC—i00． (1)基础培养基 }TC一100 900mL／L GIBco公司产品．