植物生理学刘洋.doc

植物生理学实验课程论文 学号：题目：低温胁迫对玉米抗寒性的影响 学生姓名：刘洋 任课教师：于晶 所在班级：生科1301 所在学院：生命科学学院 东北农业大学 中国·哈尔滨 2015年5月 低温胁迫对玉米抗寒性的影响 生科1301 刘洋 （东北农业大学生命科学学院，哈尔滨，150030） 摘要 对两个玉米品种（九龙11号、利禾1号）进行4℃低温胁迫处理12h和24h，以0℃为对照，测量其叶绿素含量、过氧化物酶活性和电导率。结果表明，随低温处理时间增加，九龙的叶绿素含量先降低后上升，利禾叶绿素含量先升高后降低。九龙过氧化氢酶活性升高，利禾过氧化氢酶活性降低。两种玉米伤害率均在处理12h时变为最大的现象。实验结果显示，两种玉米在低温胁迫下，均有不同程度的损害，在叶绿素含量、过氧化物酶活性和电导率这三个生理生化指标在不同温度下受到不同影响。 关键词 玉米 低温胁迫 过氧化物酶 伤害率 叶绿素含量 前言 玉米属于禾本科玉蜀黍族玉蜀黍属玉米种，随玉米逐渐传到世界各地，现成为最重要的粮食作物之一。加强对低温胁迫植物的各种生理现象的研究，了解植物的适应和逆境伤害机制，并加以人为控制对于农业高产稳产具有重要意义。低温在一定程度上破坏细胞膜，从而影响膜系统的生理功能【1】。研究指出，大部分植物在温度介于0-15℃之间时一系列生理功能被破坏【2】当外界气温和地温明显低于玉米所需的适宜温度，接近或超过其在这一时期生理状态所能忍受的极限最低温就会造成胁迫和伤害。【3】同一植物不同品种间对寒冷的抗性也有显著差异。【4】植物固着于某地生长，难以迁移，因此易于受到环境如冻害，冷害【5】等影响。 黑龙江属于高寒地区，玉米是其主要农作物之一，因此研究低温对玉米产量有重大意义。 1材料与方法 1.1材料、仪器、试剂与用品 1.1.1材料 九龙11号、利禾1号玉米种子 1.1.2仪器 分光光度计；天平；研钵；漏斗；滤纸；离心机；电导率仪；注射器；剪子；离心管;刻度试管；移液管(0.1ml，1ml，2ml，5ml，10ml)；比色杯；烧杯；吸耳球;冰箱（-20℃，4℃）；微波炉；容量瓶（25ml）；恒温箱(37℃);打孔器。 1.1.3试剂与用品： 蒸馏水；0.05mol/L磷酸缓冲盐溶液（pH=5.5）；0.05mol/L愈创木酚；2%H2O2; 20%三氯乙酸；95%乙醇。 1.2方法 1.2.1 实验前准备 1.2.1.1玉米的种植 各取300粒九龙11号与利禾1号玉米种子装入大烧杯中，先用95%乙醇浸泡消毒，再用蒸馏水冲洗一遍，随后将蒸馏水注满整个烧杯，放入37℃恒温箱中12h。将水倒掉，冲洗种子，在顶部用湿滤纸盖住。每十二小时进行一次观察，既要保持滤纸潮湿，又要保证当种子出芽后即时转入培养皿中，并在其中加水至没过种子一半处。待芽张长后，转入沙土培养基中，保持光照与沙土湿润。 1.2.1.2预处理 在做实验前12h与24h时，分别取合适数量（本实验各取7株）的九龙11号与利禾1号玉米苗，转入4℃的冰箱中。 1.2.2 植物组织中过氧化物酶活性测定 1.2.2.1酶液的制备 分别称取0.5克九龙11号与利禾1号玉米叶片，剪碎，放入研钵中，加适量的磷酸盐缓冲溶液，研磨成匀浆。将全部匀浆转入离心管中，4000rpm，离心10分钟，取上清液定容至10ml。 1.2.2.1过氧化物酶活性测定 酶活性测定的反应体系包括2.9ml 0.05mol/L磷酸缓冲盐溶液（pH=5.5），1.0ml 2%H2O2，1.0ml 0.05mol/L愈创木酚和0.1ml酶液。用加热至沸腾的酶液作对照。反应体系加入酶液后，立即放入37℃恒温箱中保温15分钟。之后加入20%三氯乙酸终止反应，然后于470nm波长下测定吸光值。 1.2.2.2计算公式 过氧化氢酶活性=（A470*VT）/(0.01*W*VS*t) A470:反应时间内吸光度的变化 VT：酶液总体积（ml） W：样品鲜重（g） VS：反应所用酶液体积（ml） t:反应时间（min） 1.2.3 电导法测定植物细胞质膜透性 1.2.3.1容器洗涤 电导法对水和容器的洁净度要求严格，所用容器必须清洗干净，再测试实验所用蒸馏水的电导值（S0）。 1.2.3.2材料处理 分别称取1.0克九龙11号与利禾1号玉米叶片，分成两份，一份放入-20℃冰箱中冷冻15分钟，另一份放在常温下。 1.2.3.3测定 先蒸馏水冲洗叶片，再用滤纸吸净水份。用打孔器避开主脉打取圆叶片，每份20片，放入烧杯中。将每份烧杯中叶片倒入注射器中，加入10ml蒸馏水，进行抽气，直至所有叶片均不