紫外分光光度计讲义（2015年版） .docVIP

紫外－可见分光光度法 原理、应用及有关注意事项 第一节 概述 紫外－可见分光光度（UV－VIS)法是一种常用的检验方法，它是通过被测物质在紫外光区的特定波长或一定波长范围内的吸光度，对该物质进行定性和定量分析的方法。紫外光谱是物质在200～400 nm的近紫外光区和400～850 nm的可见光区的吸收光谱。通常使用的紫外－可见分光光度计的工作波长范围为190～900nm,本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。适用于微量和痕量组分的分析，测定灵敏度可达到10-4～10-7g/ml或更低范围。 第二节 原理 紫外分光光度法之所以能成为一种分析方法，主要依据两点： 一、就是我们常说的吸收度，2005年版药典已将它改为吸光度，这样说可能更准确些。就是物质对光的吸收程度。我们首先说一下电磁波，所有电磁波在性质上都完全相同的，他们之间的区别仅在于波长或频率的不同。按照波长排列从短到长依次为r射线、x射线、紫外线、可见光、红外线、微波、无线电波等。电磁辐射源与物质作用时，会与物质间产生能量交换。按物质和辐射能的转换方向，光谱法可分为吸收光谱法和发射光谱法两大类。电磁辐射源照射试样时，其原子或分子选择吸收某些具有适宜能量的光子，使相应波长位置出现吸收线或吸收带，所构成的光谱为吸收光谱。利用物质的吸收光谱进行定量、定性及结构分析的方法称为吸收光谱分析法。紫外－可见吸收光谱是一种分子吸收光谱，它是由于分子中原子的外层电子跃迁而产生的。因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱有称为电子光谱。在不同的波长下测定物质对光吸收的程度（吸光度），以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标，所绘制的曲线称为吸收光谱，测定的波长范围在紫外－可见区，称紫外－可见光谱，简称紫外光谱。 由上图可以看出吸收光谱的特征：⑴曲线上“A”处称最大吸收峰，它所对应的波长称最大吸收波长，以λmax表示。⑵曲线上“B”处有一谷，称最小吸收，它所对应的波长，所对应的波长，称最小吸收波长，以λmin 表示。⑶曲线上在最大吸收峰旁边有一小峰“C”，称肩峰表示。⑷在吸收曲线的波长最短的一端，曲线上“D”处，吸收相当强，但不成峰形，此处称为末端吸收。吸收光谱中，λmax、λmin、肩峰以及整个吸收光谱的形状决定于物质的性质，其特征随物质的结构而异，所以是物质定性的依据。测定某物质的紫外吸收光谱的曲线，可与已知标准的紫外光谱图相对照对照时须注意测定的条件，如溶剂、浓度等。由于化合物紫外吸收峰较少，而且峰形都很宽，不象红外光谱是许多指纹峰，所以在用紫外吸收光谱进行化合物定性鉴定时，应注意：化合物相同，其紫外光谱应完全相同；但是紫外光谱相同不一定化合物就相同，可能仅是存在某些相同的发色团或基团，。εmax或E1%1cm），这是因为峰值吸光系数大，测定灵敏度较高，且吸收峰处与相邻的波长处吸光系数值的变化较小，测量吸光度时受波长变动影响较小，可减少误差。不只1个吸收峰的化合物，可同时用几个峰值做鉴别依据。（如药检所去年以来检的创可贴，就是在257nm、262nm、269nm三个波长处测定最大吸收，规定三个波长处都应有最大吸收，没有最大吸收就可以判定为假药）。 肩峰或吸收谷处的吸光度测定受波长变动影响也较小，有时也可用谷值、肩峰值与峰值同时作鉴别依据。（比如甲硝唑片的第三个鉴别就是分别在277 nm和241 nm的波长处分别测最大吸收和最小吸收。） 具有不同吸光基团的化合物可有相同的最大吸收波长，但它们的摩尔吸光系数常有明显的差别，所以摩尔吸光系数常用于分子结构分子结构分析中吸光基团的鉴别。对于分子中含有相同吸光基团的物质，他们的摩尔吸光系数常很接近，但可因相对分子质量不同，使百分吸光系数的值差别较大，可以用百分吸光系数作为鉴别的依据。（比如甲基睾丸酮和丙酸睾丸素在无水乙醇中的最大吸收波长λmax都在240nm，但在该波长处的E1%1cm数值，前者为540，而后者为460，因而有较大的鉴别意义）。 （摩尔吸光系数的意义是在一定的波长下，溶液浓度为1mol/L厚度为1cm时的吸光度。百分吸光系数，又称比吸光系数，只在一定波长下，溶液浓度为1％（W/V）厚度为1cm时的吸光度。） 对比吸光度比值的一致性 有时物质的吸收峰较多，可规定在几个吸收峰处吸光度或吸光系数的比值作为鉴别标准。（比如维生素B12注射液的鉴别，规定应在361nm与550nm的波长处有最大吸收；361nm波长处的吸光度与550nm波长处的吸光度的比值应为3.15～3.45）。 如果被测物质的吸收峰和对照品的相同，且峰处吸光度或吸光系数的比值又在规定范围之内，则可考虑被测样品与对照品分子结构基本相同。 第二：药品的纯度检测 纯度检测又分为杂质检查和杂质限量检测。 杂质检查 若该物质本身在紫外光区无吸