哈蟆油对雌性衰老大鼠肝肝脏组织p16%2cp21和cyclinD1蛋白表达影响.pdfVIP

·50· Ii 哈蟆油对雌性衰老大鼠肝脏组织p16，p21和cycriDl蛋白表达的影响 姚晖张继平1 邓虹珠2姜晓刚3梁颖1黄志恩11、佛山市第二人民医院药剂科；2、南方医科大学 中医药学院；3、济宁医学院病理教研室 衰老…是从生殖成熟后才开始或加速的。它是具有累积 部位注射生理盐水，每日1次，连续6周。按照“实验动物与人 性、普遍性、渐进性、内生性的生命过程，是所有生物的 按体表面积等效昔换算比率”町算出大鼠用药量：VE等效量为 共同特征，不同物种在寿限决定上有相似机制。哈蟆油旧‘叫 (Oviductus 配制。 Ranae，OR)为蛙科动物中国林蛙雌蛙的输卵 管，经采制干燥而得。具有补肾益精、养阴润肺的功能。主要 2．2检测指标及方法；用免疫组化方法检测肝脏组织p16和 成分为蛋白质及氨基酸、脂肪酸、甾体激素、无机元素、维生 素类等多种。通过对0R近20年文献分析发现H。61哈蟆油延缓机 表达。 体衰老作用机制多与抗氧化作用相关，但是哈蟆油成分复杂， 2．2．1肝脏组织内P16和p21表达的检测采用免疫组化法 仅从抗氧化角度并小能阐明其在延缓雌性衰老的机制。随着分 (SABC法)检测肝脏组织中p16和p21的表达。 子牛物学和衰老学说的发展，利用蛋白质组学技术揭示药物延 肝脏组织取材后，4％中性甲醛固定后，石蜡包埋， 缓衰老成为发展的方向。因此本实验采用D一半乳糖所致衰老 3lI111连续切片，选择多聚赖氨酸处理防脱片捞片后，置烤箱 雌性大鼠模型，采用免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western- 50-60℃烤片至干。次日二甲苯脱蜡和梯度乙醇逐级脱水，滴 iriDl blotting)探讨该药对雌性衰老大鼠肝脏p16，p21和eyel 蛋白表达的影响。 后，经微波抗原修复，PBS洗后加一抗抗体4℃过夜。应用PBS 1材料与仪器 1．1 动物SPF级健康SD雄性大鼠48只，体质量180—2009， 由南方医科大学实验动物中心提供(生产许可证号：2006 洗后，DAB溶液显色15min，在显微镜下掌握染色程度。苏木素 复染，脱水透明。中性树胶封片脱察。其中采用PBS缓冲液替 A044)。饲养室温度：20-25℃．相对湿度：40％～70％(实 代一抗或二抗作阴性埘照。 验动物中心使用许可证号：SCXK(粤)2006一0015)。置动物 h：12 结果判断标准：参考许良中等的方法H1，在光学显微镜下 于室温18～22℃。相对湿度65％，光照周期12h条件下 饲养。自由饮水、进食普通饲料。鼠笼垫板与饮水瓶定时换 每张切片随机选取4个高倍视野记数细胞，肝脏组织中STAT3以 洗，保持清洁。 胞质或胞核部分被染成棕黄(褐)色为阳性。根据阳性细胞染 1．2药材和试剂哈蟆油细粉(南方医科大学中医药学院制 色强度和阳性细胞占所观察细胞数的白．分比即阳性细胞卣分 比进行评分：染色强度打分：0分为无色，1分为淡黄色，2分 剂教研审提供，批号：071210，100目)；i)-半乳糖(国药集 为棕黄色，3分为棕褐色(染色深浅需与背景着色相对比)： 团化学试剂有限公司，批号：维生素E软胶囊(广 阳性细胞所占百分比打分：0分