基于交联探针信号放大适配体电致化学发光生物传感器检测超痕量凝血酶.pdfVIP

基于交联探针信号放大的适配体电致化学发光生物传感器检测超 痕量凝血酶 吴晓燕，张静，陈敬华，付凤富* 福州大学食品安全分析与检测技术教育部重点实验室，福州 福建，350108 *联系人: 传真: 0591电话: 0591E-mail: fengfu@fzu.edu.cn 电致化学发光作为一种高灵敏度，高选择性的分析方法，近来受到广泛的关 注。核酸适配体是通过SELEX技术筛选出来单链寡聚核苷酸，相对于抗体适配体不 但具有较高的特异性，而且具有很好的稳定性。本文通过纳米金胶与2,2’-钌联 吡啶Ru(bpy)32+形成复合物固定在电极表面，利用二茂铁能够高效率猝灭钌联吡啶 化合物电致发光的性质，结合交联探针结构，构建了一种高灵敏的电致化学发光 检测凝血酶的新型适配体电致化学发光生物传感器，其原理如图1所示。首先，将 Ru(bpy)32+与纳米金形成的复合物，经巯乙胺将其偶联到金电极上，再通过Au-S键 将交联结构的探针组装到纳米金胶上。形成交联结构的3条DNA探针包括：（1）固 定探针是一端修饰巯基的DNA序列；（2）捕获探针是凝血酶的适配体DNA序列；（3） 信号探针是一端修饰二茂铁的DNA序列。当交联结构被修饰在电极表面上时，二茂 铁分子可以近距离接触固定在电极上的金钌复合物，对其ECL产生高效碎灭，使修 饰电极的ECL强度较低。通过凝血酶与捕获探针的核酸适配体的特异性结合，打开 交联结构的肩部互补碱基对，使得含有二茂铁信号探针远离电极表面，通过前后 电致化学发光的差值来定量测定凝血酶。以此适配体生物传感器来检测凝血酶， 达到良好的效果，线性范围为0.05pM-100pM，检测限达到8.0×10−15M 。 A signal-on electrochemiluminescence aptamer biosensor for the detection of ultratrace thrombin based on junction-probe XiaoYan Wu, Jing Zhang , JingHua Chen, FengFu Fu* （Key Lab of Analysis and Detection for Food Safety of Ministry of Education, Department of Chemistry, Fuzhou University,Fujian 350108, China. ） A novel signal-on junction-probe electrogenerated chemiluminescence aptamer biosensor has been developed for the detection of ultratrace thrombin based on a structure-switching ECL-quenching mechanism. The ECL aptamer biosensor comprises two main parts: an ECL substrate and an ECL intensity switch. The ECL substrate was made by modifying the complex of Au nanoparticle and ruthenium (II) tris-bipyridine (Ru(bpy)32+–AuNPs) on the surface of gold electrode (GE), and the ECL intensity switch contains three probes designed according to the “junction-probe” strategy. The first probe is capture probe (Cp) which was functionalized with a thiol group at one end and covalently attached to Ru(bpy)32+–AuNPs modified GE t