三叶悬钩子对3种肿瘤细胞体外生长抑制作用.docVIP

三叶悬钩子对3种肿瘤细胞体外生长的抑制作用 李坤龙 A120501009 研究背景及意义： 三叶悬钩子为蔷薇类悬钩子属植物，又名散血草、刺黄连、刺茶和三叶蔍等，主要分布在云南省海拔2000-3000m的地方。其味甘、微酸、性平，具有清热解毒、除湿止痢和杀虫的功能，主要治疗扁桃体炎、腮腺炎、乳腺炎、无名肿毒和急慢性肝炎等症状。据文献报道，悬钩子属植物具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗过敏、保肝、镇痛和抗肿瘤等作用，而国内对三叶悬钩子体外抗肿瘤作用的研究鲜有报道。笔者在前期研究的基础上，进一步研究三叶悬钩子对SGC7901、K562和HT60细胞的体外生长抑制作用，以期为三叶悬钩子的开发及应用提供理论依据。 1方法: 样品的提取。将三叶悬钩子样品，干燥、粉碎、过50目筛，然后加浓度95%乙醇回流提取3次，合并并回收乙醇，得到浸膏。取浸膏分散在蒸馏水中，分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇依次萃取，回收溶液，分别得到石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和水提取物，5份样品分别冷冻干燥，保存备用。 细胞的培养。将保存的SGC7901、K562和HL60细胞株复苏后分别转移至培养瓶中，加入浓度10%新生牛血清的RPMI-1640培养液（完全培养基），置37℃、浓度5%CO2及饱和湿度的培养箱中培养，每隔1-2天更换新完全培养基继续培养。当细胞长满培养瓶底部80%以上时，以1:2或1:3进行传代，继续置培养箱中培养。选择连续传2-3代的细胞用于试验。 MTT法检测三叶悬钩子对三株肿瘤细胞的抑制作用。取对数生长期的SGC7901、K562和HL60细胞，制成细胞悬液，用完全培养基调整细胞数浓度为4*10^4个∕ml。用96孔板经行试验，每株细胞分别设石油醚提取物组、氯仿提取物组、乙酸乙酯提取物组、正乙醇提取物组和水提取物组，每组设5个浓度，阳性对照组（顺铂3个浓度），阴性对照组（浓度3%DMSO组和N.S组）及调零组，出调零组和阴性对照组设8个复孔外，其他组每个浓度设4个复孔。调零组加完全培养基；其他组加配好的细胞培养液；置37℃、浓度5%CO2及饱和湿度培养箱中培养24h后，各样品组依次加入不同质量浓度的石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物、正乙醇提取物和水提取物，使其浓度分别为300、100、30、10和3微克每毫升；阳性对照组依次加入不同质量浓度的顺铂，使其浓度分别为10、1和0.1微克每毫升；阴性对照组加入浓度3%DM-SO和N.C；调零组加完全培养基，继续置37℃、浓度5%CO2及饱和湿度的培养箱中培养48h后，每孔加入10微升浓度5毫克每毫升的MTT溶液，继续培养4h后，每孔加入100微升三联液，使结晶溶解，于37℃放置12h，用酶标仪在570纳米和630nm下测定吸光度A值。试验重复3次，按公式计算抑制率。计算公式为： 细胞生长抑制率(%)=1-(试验组平均A值-调零组A值)∕(阴性组平均A值-调零组平均A值)*100 数据处理。试验数据采用t检验，抑制率与浓度关系用折线图表示，用SPSS11.0统计软件处理。 结果 MTT法试验结果表明，三叶悬钩子乙酸乙酯提取物、正乙醇提取物及水提取物对体外SGC7901、K562及HL60细胞的生长几乎无抑制作用；而氯仿提取物和石油醚提取物对体外SGC7901、K562及HL60细胞的生长具有较好的抑制作用，抑制作用随药物浓度的增大而增强，并且其对SGC7901和K562细胞的半数抑制浓度均小于或者接近50微克每毫升，但对HL60细胞的细胞毒活性相对较弱，提示三叶悬钩子在治疗胃癌及红细胞白血病方面具有潜在的价值。因此，在三叶悬钩子体外抗SGC7901、K562及HL60细胞生长研究的基础上，参考国内外文献，可以进一步探讨其抗癌细胞生长的作用机制，为三叶悬钩子的开发及应用提供科学的理论依据。