怀地黄发根农杆菌转化和种内遗传多样性分析.pdfVIP

怀地黄发根农杆菌转化和种内遗传多样性分析.pdf

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摘要 本课题初步建立了怀地黄毛状根的遗传转化及其梓醇HPIC测定体系和植株再生体 系,对怀地黄转化的几种影响因素以及激素对毛状根再生植株的影响进行了研究,所得结 果如下:发根农杆菌15834菌液的OD值在o.65~0.8之间时,可以有效地用于转化;当 发根农杆菌与外植体共感染时间为30min时毛根诱导,毛根诱导效果比较好,毛根诱导率 为44.7%,毛根诱导密度为5.84;10~15d叶片的毛根诱导率及毛根诱导密度最高,分别 达44.O%和5.8;乙酰丁香酮有助于毛根诱导密度的提高,但对提高毛根诱导率的作用不 很明显。经过抗生素除菌和Kan‘筛选方法获得了毛状根株系,对毛状根进行了PcR和冠 瘿碱检测,证明发根农杆菌Ri质粒的T_DNA区转入毛状根并在其中表达冠瘿碱产物。 黄的48.5%,是生地黄的18%。而培养35d的正常未转化的怀地黄根中未检测到梓醇。毛 再生率较低,约为40%。冠瘿碱纸电泳和PcR电泳检测转化再生植株叶片发现其中被转 未转化植株进行的同工酶分析结果表明, POD分析时,未转化叶片表现出两条带a和b, 而转化植株除了在相同的距离也有两条带外,在近点样点端还有一条带c,转化植株中的 带a比未转化中的颜色浅且窄,活性相对较弱,带b比未转化中的颜色深且宽,活性相对 较强; EsT分析时,未转化植株和再生植株均只显现出一条带,再生植株中的带比未转 化中的颜色浅且窄,活性相对较弱。 引物共扩增出7条带,其中多态性条带为4个,多态性比率为57.14%。2个IssR引物共 扩增出17条带,其中多态性条带为11个,多态性比率为64.7%。结果表明,怀地黄85.5 品种内存在一定的遗传多样性,但比地黄品种间的遗传多样性较低。 关键词:发根农杆菌15834;怀地黄85—5;遗传转化;毛状根;再生植株;遗传多样性 Abstract i11 First,the traⅡsfo珊ation L西。曲.厂.^“Pfc柳咒昌曰15西f(弘no甜 genet主c R已^历口,l挖谊gf“f跏Dj4 cultivarwascaⅡiedoutforthefirsttime Schlh)Hsiao transfb珊atioⅡ.Thee船ctsofdi行erent asdi如rent factors,such of爿gm6dc陀,f“Ⅲ growthperiods different AS the and on inductionof roots 兆渤g蹦eS infection曲ne,dif&rent hairy explants werestudied-Theresultsshowedthatbacterias嘶n15834was forthetransfomationin 900d rate 0Dwasbetween fnductionof44.7% &矗掰4艨缸咖砌D磁三渤砌when 0.65~O.8;Hi班er alld induction of 5.84couldbe in minutcsafter indensity acquiredthiny for10~15dwerebetter older AS be

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