蛋白激酶C对炎性痛大鼠脊髓神经元凋亡以及相关蛋白Bax表达影响.pdfVIP

中文摘要 蛋白激酶C对炎性痛大鼠脊髓神经元凋亡以及相关 蛋白Bax表达的影响 摘 要 kinaseC，PKC)是由多个 目的：蛋白激酶C(protein 可被Ca2+激活的丝氨酸蛋白激酶和苏氨酸蛋白激酶所组成 超家族，存在于细胞浆内，是重要的细胞内信号转导分子。 PKC存在于包括中枢神经系统在内的多种组织中，在神经元 兴奋性的调节、细胞内信号转导、神经递质的释放、突触可 塑性等过程中发挥重要作用。在静息情况下，PKC以无活性 的形式存在于细胞浆中，当有外界刺激存在时，PKC被激活 的生理功能。 我室以往的研究证实，甲醛炎性痛可诱导大鼠脊髓神经 元内PKC活化；我室的研究还证实，甲醛炎性痛可诱导大 鼠脊髓神经元凋亡。有关PKC激活在脊髓伤害性信息传递 及痛觉过敏方面的作用已有一些报道，但PKC是否参与甲 醛炎性痛诱导的脊髓神经元凋亡过程尚未见相关报道。 Bax蛋白是调控细胞凋亡的相关蛋白之一，能够促进细 胞凋亡过程。Bax蛋白存在于细胞浆中，广泛分布于机体各 组织，无明显的组织特异性。如果甲醛炎性痛引起PKC活 性改变参与伤害性信息传入引起的脊髓神经元凋亡过程，其 是否通过影响Bax蛋白表达而影响神经元凋亡尚有待进一步 研究加以证实。 因此，本实验首先采用流式细胞技术，观察预先鞘内注 中文摘要 射PKC抑制剂灯盏花素乙(Chelerythrine 甲醛炎性痛大鼠L¨脊髓节段神经元凋亡率的影响，并观察 探讨PKC在甲醛炎性痛诱导大鼠脊髓神经元凋亡中的作用。 在此基础上，采用免疫组织化学方法，观察了甲醛炎性痛诱 导大鼠脊髓后角神经元内凋亡相关蛋白Bax表达的改变，并 通过鞘内注射PKC激动剂及抑制剂，观察PKC对大鼠脊髓 后角神经元凋亡相关蛋白Bax表达的影响，探讨PKC参与 甲醛炎性痛诱导脊髓神经元凋亡的机制。 1PKC对甲醛炎性痛大鼠脊髓神经元凋亡的影响 组不做任何处理，直接断头取材。F组于大鼠右侧足底注射 甲醛，于甲醛注射后3d时取材。PMA组于正常大鼠鞘内注 PMA后，于鞘内注射PMA后3d时取材。采用流式 射10I_tl 细胞技术检测脊髓神经元的凋亡率。 结果发现，正常大鼠鞘内注射PMA后，动物出现烦躁 不安，搔抓盒底、舔咬物品和自发退缩等伤害性感受行为， 表明鞘内注射PMA可诱导正常大鼠产生自发痛反应。 流式细胞技术检测结果发现，control组大鼠L躺脊髓神 中文摘要 经元凋亡率很低。与control组相比，F组大鼠k，脊髓神经 髓神经元凋亡率无显著性差异，表明鞘内注射溶剂DMSO对 脊髓神经元凋亡率无明显影响。与F组相比，F+CH组大鼠 PMA组大鼠脊髓神经元凋亡率则表现为明显升高(P O．01)o 以上结果表明，PKC可以促进脊髓神经元凋亡，在甲醛 炎性痛诱导的大鼠脊髓神经元凋亡过程中，PKC起促进神经 元凋亡的作用。 2甲醛炎性痛诱导大鼠脊髓后角神经元凋亡相关蛋白Bax表 达改变及其PKC对Bax蛋白表达的影响 2．1甲醛炎性痛诱导脊髓后角神经元凋亡相关蛋白Bax表达 改变 理，直接断头取材。甲醛各组动物均于足底注射甲醛后相应 时间点断头取L¨脊髓节段，应用免疫组织化学方法观察k5 脊髓后角I．II板层神经元Bax蛋白的表达。 结果发现，大鼠右后足底注射甲醛后，立即出现舔、摇、 和自发性缩足等白发痛行为，且注射部位出现红、肿等明显 的炎症反应，表明动物出现了炎性痛。 免疫组化检测结果发现，control组大鼠k5脊髓后角 I—II板层Bax免疫反应阳性细胞面积较小，细胞染色较浅。 中文摘要 与control组相比，足底注射甲醛后12h，大鼠两侧脊髓后角 但阳性细胞平均光密度值增加不明显(尸O．05)，表明Bax 表达已有所增加；足底注射甲醛ld时，大鼠脊髓后角Bax 免疫反应阳性细胞面积进一步增大(尸O．01)，达到峰值， 免疫反应阳性细胞平均光密度值也明显增加(PO．01)，表 明细胞染色也明显加深；与Fld组比较，F2d组大鼠