靶向Survivin基因RNA干扰抑制膀胱癌生长实验研究.pdf

靶鼬Sm-vivin基因扮RNA干扰撺蒯膀胱癌生长豹变验研究 申支摘鹫 靶向Survivin基因的RNA干扰抑制膀胱癌 生长的实验研究 中文摘簧 目的和意义膀麟瘸是我国泌旅生殖系统最靠觅恶性肿瘤。首次确诊时多为 表演佳。封裁对袭浅性膀胱癌常规治疗为经尿邋耄切术(TUR)、术霞辅以膀魏 灌注化疗或免疫治疗。帮使如此膀魏癌仍有较高的复发率，因北开发蔟豹膀胱肉 灌注药物是膀航癌研究的一个方向。Survivin是胂瘸纂因治疗的潜在靶点，蕊RNA 千挽是近年发现豹商效纂因派歉方法，本研究承接前期实验成果，探讨丁靶自 S吲吨堪囡的鼢渣干扰对膀胱癌细臌挖4皮下辨瘤生长豹影响，以及在原位动 物模型中对膀胱癌的治疗作用。 人膀髋癌细服似并获得稳定的尊党隆缁魏。实时定量PCR检测稳定转染：F扰成 粒后T24缍胞SurvivinmRNA变化，将稳定转染予扰厦粒的单竟隆细胞与来转染 豹324纲腌分别接种予5灵操虢皮下，鼹察肿瘤生长情况，肿瘸组织行免疫缀化 膀胱癌T24细胞经屎道种植予25只裸鼠膀虢，建立赞入膀胱癌原位动物模型。戳 Gd-DTPA作为膀胱造影翔，每周取5只裸鼠行MR检测瓣瘤的生长，MR检查质即 取裸飘耪胱组织标奉行HE染色遴行瘸理学检煮。(3)翔法建立膀虢瘵动物模激 分为4缀，每鳃6只檬鬣，A组：苓予饪秘处理{B缎t耪胱落注浓度0．5mg／ml的 丝裂霉索；C缎：膀胱灌注浓度为150．s／ml 扰旗粒和丝裂霉素交替膀胱灌注；膀麟灌注治疗6次后菊瘸膀胱称重，行病理学 检查及免疫缀他检测耪胱脾癌Sarvivin、Caspase-3表达。 缀簿选暑鞋挑欹单毙隧盛测褥转染细胞的表达率先94．7％，稳定转染重组质牧的 T24细髓tSurvlvin mRNA表达下调达92。86e；撩鬣皮下接种肿瘤缨跑蜃，朱转染 1311113的肿瘤，转染组在43天时形成3个体积 组在20—29天均发震为体积超过2000 不趣避62．5 25只裸鼠在种植124细胞矗均形成耪胱肿癯。种植詹7天裸鼠膀斌MR检查置明显 靶向Survivin基因的RNA干扰抑制膀胱癌生长的实验研究 中文摘要 变化，14、2l、28天MR检查均可发现膀胱不同程度的充盈缺损，MR图像与肿瘤 实际大小吻合。病理检查显示：种植后7天，肿瘤生长于裸鼠膀胱粘膜或肌肉表 4组膀 层；14～28天局限于肌层；35天时侵及浆膜层。(3)测得A、B、C、D 浓度为150 mg／ml_缝裂霉素相 p咖l靶向Sun，i、，in的干扰质粒膀胱灌注达到与O．5 近的抗肿瘤作用(尸卸．404)，两者交替膀胱灌注较单用丝裂霉素或干扰质粒更 有效抑制膀胱肿瘤生长(／20．05)．免疫组化显示：A组膀胱肿瘤浅层与深层 SⅢvivin表达减弱；B、C、D组膀胱肿瘤浅层呈现Caspase-3高表达。 移植瘤生长；Survivin基因可作为膀胱癌基因治疗的良好靶点．(2)成功建立了 裸鼠原位膀胱癌动物模型，肿瘤生长基本模拟了人膀胱癌的发生、发展过程； MR检查可作为对裸鼠膀胱原位肿瘤动态观察的可靠方法。(3)靶向Survivin 的干扰质粒膀胱灌注可达到与丝裂霉素相近的效果，两者交替膀胱灌注可明显增 加丝裂霉素的抗肿瘤作用。可能机制为阻断膀胱肿瘤Survivin表达引起肿瘤细胞 凋亡，抑制肿瘤生长；因与丝裂霉素作用于不同细胞周期增强了膀胱肿瘤对丝裂 霉素的化疗敏感性。综上所述，本研究发现靶向Survivin的R．HA干扰对膀胱癌 细胞T24裸鼠皮下及原位移植瘤的抑制作用，结合前期体外实验结论，认为 Survivin基因可作为膀胱癌基因治疗的良好靶点，但作用机制和I临床实施方法有 待进一步研究。 【关键词】膀胱肿瘤；Survivin基因；RNA干扰；短发夹状RNA；动物模型； 磁共振成像；基因治疗：凋亡 作 者： 杨慎敏