SHG-44人胶质瘤细胞的离子通道特性及他莫昔芬抗胶质瘤作用的机制的研究.pdf

中文摘要 SHG．44人胶质瘤细胞的离子通道特性及他莫昔 芬抗胶质瘤作用的机制研究 摘 要 目的：脑恶性胶质瘤起源于神经胶质细胞，是中枢神经系统最常见 的恶性肿瘤，约占全部脑肿瘤的5060％。胶质瘤患者症状发展快，危 害严重，不易控制及治疗，是危害人类健康的重要杀手。目前，脑胶质 瘤的治疗手段主要包括手术治疗、放射治疗、化学治疗和综合治疗等， 尽管近年来上述治疗措施己取得长足进步，但由于胶质瘤呈浸润性生长， 与周围脑组织无明显分界且易于复发，疗效均不甚理想，尤其是高度恶 性的胶质瘤，在临床治疗中经常会出现对放疗的不敏感或对化疗的耐药 性，导致临床治疗效果不佳，预后差。因此，胶质瘤的治疗一直是神经 外科最棘手的问题之一。对胶质瘤生物特性研究的不断深入，寻找调控 胶质瘤细胞恶性生物学行为的分子靶标，明确其在胶质瘤发病过程中的 病理机制，将有助于寻找新的、肿瘤类型特异性的治疗策略，这已成为 神经外科领域的研究热点之一。 细胞膜离子通道以其主要通过的离子可分为钾、钠、氯、钙通道。 离子通道的开放可引起细胞内相应离子浓度的变化，这种变化引起细胞 的各种生理病理活动。但每类通道因其电流特性不同又可分为多个亚型， 每型通道的门控方式和调控模式各有不同。不同类型细胞中相同类型的 离子通道其分布密度、通道特性、调控方式及功能作用也有差别，甚至 截然相反。在胶质瘤细胞中，离子通道有特殊重要的作用，研究表明， 钾通道的活动与瘤细胞的增殖与侵袭有关，钠通道的活动与肿瘤细胞的 分裂有关，氯通道介导的细胞变形作用对胶质瘤侵袭至关重要。鉴于离 子通道在细胞增殖中的重要作用，而胶质瘤细胞又具备高度增殖的能力， 那么在分子水平寻找新的抗肿瘤方法可以将离子通道作为靶向目标。对 胶质瘤细胞上离子通道的特性及调控研究将有助于揭示胶质瘤细胞病理 生理变化机制，为寻找新的治疗手段提供重要的理论依据。 国外已经进行了多种胶质瘤细胞株生物特性及膜上离子通道的特性 及调控研究。国内也进行了～些药物对胶质瘤细胞增殖分化影响的研究。 中文摘要 研究发现，常用于乳腺癌治疗的雌激素受体竞争性拮抗剂他莫昔芬对胶 质瘤的治疗有效。体外试验证明他莫昔芬可以抑制胶质瘤增殖及迁移。 但是它的作用机制复杂，并且还没有被彻底阐明。新的研究发现，他莫 昔芬对多种离子通道有调控作用，这可能是其抗瘤作用机制之一，但其 对胶质瘤细胞膜上离子通道调控的方式及机制还不清楚，有待我们阐明。 c—fos基因是即刻早期基因的重要成员，其编码蛋白是真核细胞内重 要的转录因子，可诱导下游报道基因mRNA的转录和蛋白表达，参与细 胞增殖和凋亡调控。c．fos基因表达异常增加可干扰细胞增殖和凋亡的动 态平衡，诱导细胞转化和肿瘤形成。对它的调控可改变肿瘤细胞增殖特 性。其调控方式复杂，PKC在其中起重要作用。揭示其调控机制对抗癌 防癌有重要意义。 人恶性胶质瘤细胞株，SHG．44经常被用于各种研究，其生物学性 状稳定、易于培养。但是，人们对其基因调控、细胞膜上离子通道的特 性及调控等方面所做的研究还鲜有报道。鉴于SHG．44细胞株上膜离子 通道及c．fos基因表达调控对肿瘤细胞的生长、增殖、侵袭、凋亡等重要 生物学特性具备的重要意义，进行了此研究。研究共分三个部分。 第一部分他莫昔芬对SItG．44人胶质瘤细胞的增殖抑制作用研究 方法：1、复苏并培养SHG．44胶质瘤细胞。显微镜观察应用不同浓 度他莫昔芬后SHG．44细胞生长情况及形态的变化。2、免疫组化检测细 胞PKC 出现棕黄色染色，ER阳性：SHG．44细胞的细胞核中出现棕黄色染色。3、 5H 以MTT法检测应用浓度依次为0、2、4、6、8、10、1mol／L的他莫 昔芬培养1～3d后SHG一44细胞的生存率。4、以流式细胞仪检测应用浓 la 度为0、2、4、6 及细胞周期情况。5、运用统计软件spssl2．0对结果进行统计学分析， 多组间比较采用单因素方差分析，组间比较采用q检验。 镜下可见细胞呈长梭形，核异形性常见。细胞的冻存与复苏对细胞生物 学特性