Megsin在糖尿病肾病发病机制中的作用.pdf

中文摘要 i n在糖尿病肾病发病机制中的作用 Megs 摘 要 目的：糖尿病’肾病(diabetic mellitus，DM) 严重的慢性微血管并发症。随着全球范围内糖尿病(diabetes renal 发病率逐年升高，糖尿病肾病逐渐成为导致终末期肾衰竭(end—stage 生命，严重影响了生存质量，给家庭和社会带来沉重的经济负担和精神压 力。如何早期有效防治糖尿病肾病是当今国内外学者热切关注的课题。 糖尿病。肾病的病理特征是肾小球系膜细胞增生、肥大，细胞外基质积 cell， 聚，最终发生肾小球硬化。肾小球系膜细胞(glomerularmesangial GMC)是肾脏重要的固有细胞(inherent cell)之一，在肾脏的组织结构 和生理功能方面发挥着重要作用，具有产生细胞外基质、分泌细胞因子、 吞噬和清除异物等多种功能。肾小球系膜细胞也是多种致病因子作用的主 要靶细胞，在病变进展中扮演着重要角色。Megsin是一种系膜细胞优势表 达基因，定位于1 site loop，RSL)与丝氨酸蛋白酶结合，发挥丝氨酸蛋白酶抑制剂(serineprotease 症、细胞增殖、凋亡、信号转导、消化等多个系统，serpin与其作用底物 丝氨酸蛋白酶之间的动态平衡与机体各项生理活动的正常进行息息相关， 探讨megsin在肾小球系膜细胞中的作用对于深入揭示糖尿病肾病的发生 机制具有重要意义。 本研究拟通过临床和基础研究两方面，观察megsin在糖尿病状态下肾 组织中的表达变化；分别构建megsin表达质粒幂DmegsinsiRNA表达质粒， 转染CD一1小鼠和小鼠肾脏系膜细胞，从整体、细胞和分子水平探讨megsin 与系膜细胞增殖程度、细胞外基质代谢关键酶基质金属蛋白酶．2(matrix inhibitorof 中文摘要 reductase A，HMG—CoA)还原酶抑制剂(HMG．CoAinhibitor． coenzyme 肾病发生的作用，筛选从基因或蛋白水平阻断megsin致病作用的有效途 径，为进一步阐明糖尿病肾病发病的分子机制及其防治提供一条新思路。 方法： 合征患者38例，经。肾活检病理检查并结合临床资料确诊糖尿病肾病18 例和微小病变性肾小球病，确定为研究对象，另外5例正常肾组织(选自 我院泌尿外科。肾癌患者手术切除的肾脏病灶远周部分)作为正常对照组， 进行免疫组织化学染色，并半定量分析各组肾组织标本中megsin的表达。 第二部分：建立单侧肾切除+链脲佐菌素诱导的CD一1小鼠糖尿病模 1次，同时设立单纯单侧肾切除组(A组，n=15)和单侧肾切除+糖尿病+ 空质粒转染组(B组，n=l5、)，实验共12周，分别于第l、2和12周末收 集各组小鼠血、尿和肾组织标本，测定血糖(blood glucose，BG)、血肌 酐(serum creatinine，Scr)、肾重／体重比值(Kidneyweight／bodyweight ratio，KW／BW)、尿蛋白(Urinary protein，UP)，分别应用免疫组织化学染 色和western 境中培养48小时，同时设立野生型小鼠系膜细胞正常糖培养组(A