SKBR-3乳腺癌细胞中Hsp70与Her-2蛋白复合物的鉴定及其提取纯化.pdfVIP

摘 要 乳腺癌是严重威胁妇女健康的疾病，占女性恶性肿瘤死亡率的首位，近年来， 国内外大量研究显示：原癌基因Her-2在20％~30％的乳腺癌患者中可见扩增和过度 表达，该基因的扩增及其过表达常提示肿瘤恶性程度高，可作为判断乳腺癌预后的一 个独立指标。此外，大量研究表明，来源于肿瘤的组织或细胞中存在一种或多种不同 水平热休克蛋白的表达，其中热休克蛋白70与肿瘤的发生、发展密切相关。随着对热 休克蛋白70结构、功能以及与其相关蛋白作用的了解，为肿瘤治疗的研究打开了新局 鉴定、提取及纯化的方法，拟建立一个稳定、高效的分离、纯化技术平台，为探索新 的乳腺癌个体化免疫治疗奠定理论及实验基础。 本文以高表达原癌基因Her-2的乳腺癌细胞株SKBR．3作为实验细胞，经流式细胞 蛋白与Hsp70在细胞株中以复合物的形式存在。采用裂解液裂解、超声破碎、高速离 心、CortA agarose亲和层析方法，从热休克(42℃)处理 Sepharose亲和层析结合ADP 工作的完成为进一步研究以Hsp70／Her-2癌基因蛋白复合物为基础的乳腺癌免疫治疗 提供了依据。． 关键词：乳腺癌细胞株；热休克蛋白70；Her-2；分离纯化 Purification Identificationand of andtheHer一2Protein Hsp70 intheSKBR一3 Complex BreastCancerCells Abstract BreastcRncer1sakindofdisease women’Shealth death threatening seriously,whose rate thefirstinfemalecancers．Inrecent studieshave is years，numerous shownthat Her-2is in20％～30％ofbreastcancer proto—oncogeneoverexpressed patients，which a oftumor andcouldbeusedasan indicator promptshi曲degree malignancy independent of studiesalsohaveshownthat kindsofheatshock prognosis．Inaddition，many many are atdifferentlevelsinthetissuescells or derivedfrom proteinsexpressed tumors，in whichheatshock relatedtotheoccurrenceand protein70(Hsp70)isclosely development of tumors．Withthe ofthestructureand many understanding functionofHer-2and