RASSF1A基因甲基化在卵巢癌患者血液中表达.pdfVIP

RASSF1A 基因甲基化在卵巢癌患者血液中的表达1 1 1 2 马琳 ，刘芙蓉 ，张淑兰 1 中国医科大学附属第二临床学院妇产科，沈阳（110013 ） 2 中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室，沈阳（110013 ） E-mail ：zsl0909@ 摘 要：目的 探讨循环肿瘤DNA 中RASSF1A 基因的甲基化及其与卵巢癌的关系。方法 应用甲基化特异性 PCR (MSP)方法,对 51 名正常健康人、51 例卵巢癌患者和 51 例卵巢良性 肿瘤患者循环 DNA RASSF1A 基因的甲基化进行了检测。结果 51 名正常健康人和 51 例卵 巢良性肿瘤患者循环DNA RASSF1A 基因甲基化的发生率均为 0; 51 例卵巢癌患者循环肿瘤 DNA RASSF1A 甲基化的发生率为43.1% ( 22 /51, P 0.05) 。RASSF1A 甲基化与卵巢癌组 织学类型无明显相关性( P 0.05) 。临床 Ⅰ期和 Ⅱ期循环肿瘤 DNA RASSF1A 基因甲基化的 发生率明显低于临床Ⅲ期和Ⅳ期(P0.05) ; 高和中分化组 RASSF1A 基因甲基化的发生率低 于低分化组(P0.05) 。结论 RASSF1A 基因甲基化在卵巢癌的发生和发展过程中起重要作 用。卵巢癌患者的循环肿瘤DNA 中可以检测到RASSF1A 基因的甲基化,与卵巢癌的临床分 期和组织学分级有关。循环肿瘤 DNA 中RASSF1A 甲基化的检测有助于卵巢癌的诊断和预 后判定。 关键词：卵巢肿瘤；DNA 甲基化；RASSF1A 基因；抑制,肿瘤 卵巢癌在妇科肿瘤中死亡率高居首位,主要原因是其发病隐匿,不易早期诊断。循环肿瘤 DNA 概念的提出,为检测卵巢癌患者血液中肿瘤相关基因的改变开辟了新的途径。我们应用 甲基化特异性PCR (methylation －specific PCR, MSP) 方法,检测卵巢癌患者血液中循环肿瘤 DNA RASSF1A 基因的甲基化, 目的在于探讨循环肿瘤DNA RASSF1A 基因甲基化在卵巢癌 诊断和预后中的作用。 1. 材料与方法 １、标本来源: 51 例卵巢癌和 51 例卵巢良性肿瘤患者的血液标本分别取自 2000—2003 年在 中国医科大学附属第二医院住院治疗患者,标本均于手术前采集, 51 例正常血液标本取自健 康人。血液样本采集后立即离心, 10 min 后保留上清液 1 ml, - 30℃保存。所有卵巢癌病例术 前均未经放疗和化疗。其中卵巢癌包括:浆液性囊腺癌 25 例,黏液性囊腺癌 11 例, 内膜样癌 10 例,恶性畸胎瘤 5 例; Ⅰ期 11 例, Ⅱ期 10 例, Ⅲ期 24 例, Ⅳ期 6 例;高分化 19 例,中分化 12 例,低分化 20 例。卵巢良性肿瘤包括:浆液性囊腺瘤 27 例,黏液性囊腺瘤 13 例, 成熟畸胎瘤 11 例。所有病例均经病理确诊。 2 、DNA 提取:血清 DNA 应用 Qiagen Column 纯化,按照 Qiagen 公司 QIAamp BloodMini Kit 试剂盒说明进行。紫外分光光度计测定 DNA 含量。 3 、甲基化特异性PCR (MSP) : 首先应用 hydroquinone 和 NaHSO3 (Sigma 公司)对 DNA 进行 甲基化处理, 然后 PCR 扩增 (Takara 公司) 。RASSF1A 甲基化引物, 上游 : 5′－ GGGTTTTGCGAGAGCGCG －3′; 下游: 5′－GCTAACAAACGCGAACCG －3′。RASSF1A 非 甲 基 化 引 物 , 上 游 : 5′ － GGTTTTGTGAGAGTGTGTTTAG － 3′; 下 游 : 5′ － CACTAACAAACACAAACCAAAC －3′(上海基康公司) 。10µ