饲喂肉牛抗菌药对牛源大肠杆菌Ⅰ型整合子相关的耐药性影响的的研究.pdf

摘 要 抗菌药促生长剂在畜牧业生产中的大量使用促进了动物源耐药菌的产生和传 播，并且这些耐药菌株可通过食物链传递给人。目前，由此引发的细菌耐药性的蔓 延已经成为一个全球性关注的公共卫生问题，这给畜牧业发展和人类健康带来极大 的潜在威胁。为了检测饲喂肉牛抗菌药添加剂对牛源大肠杆菌与Ⅰ型整合子相关的 耐药性的影响，本研究对从饲喂金霉素 (A44)或金霉素和磺胺甲嘧啶混合物 (AS700) 以及没有饲喂任何抗菌药 (对照组)的肉牛分离的 204 株耐四环素大肠杆菌 (对照组， n=111；A44 组，n=40；AS700 组，n=53)进行了对 11 种常用抗菌药物的药敏检测分 析，并利用 PCR 技术、酶切图谱分析和直接测序法对从饲喂不同处理组肉牛分离的 大肠杆菌Ⅰ型整合子/基因盒的流行性及所有菌株的种系发生分型进行了调查、分析 及鉴定。 随后，采用 PFGE 分子分型技术对 36 株经上述研究鉴定的携带整合子的大肠杆 菌间的亲缘关系和流行相关性进行了研究，并且通过 PCR 技术检测了与牛源大肠杆 菌中所表现的主要耐药表型相关的耐药基因的流行情况，并对这些耐药基因与整合 子间的相关性进行了分析。 药敏试验结果显示 AS700 组和 A44 组大肠杆菌分离株的耐药率整体上而言要高 于对照组分离株，其中对氨苄西林、氯霉素、链霉素的耐药率，AS700 组和 A44 组 分离株均显著高于 (P＜0.01)对照组分离株。不同处理组牛源大肠杆菌中Ⅰ型整合 子的流行性检测结果表明，A44 组 (33%)和 AS700(28%)组分离株 Ⅰ型整合子携带率 要显著高于 (P＜0.001)对照组分离株 (7%)的携带率。对基因盒进行测序分析显示， 本研究分离的牛源大肠杆菌中有 8 种基因盒流行，主要集中在甲氧苄啶耐药基因家 族 (dfr)和氨基糖苷类耐药基因家族 (aad)上。八种基因盒分别编码了对氨基糖苷类 药物 (aadA1，aadA2，aadA4，aadA5)，甲氧苄啶(dfrA1，dfrA12，dfrA17)和氯霉 素(catB3)的耐药性。其中，基因盒排列 aadA1 和 dfrA12-orfF-aadA2 流行最为广 泛， dfrA1-catB3-aadA4 为牛源大肠杆菌中首次报道。 通过分析牛源大肠杆菌的耐药表型和 Ⅰ型整合子的关系发现，菌株是否携带Ⅰ 型整合子与其多重耐药水平有密切关系。携带Ⅰ型整合子的菌株绝大部分耐受链霉 素、磺胺药、氨苄西林以及氯霉素；而菌株对喹诺酮类、阿莫西林-克拉维酸耐药 表型与Ⅰ型整合子及耐药基因盒携带相关性不强。86%的整合子阳性菌株属于大肠 杆菌种系发生分型 B1 组群。携带整合子的大肠杆菌 PFGE 分子分型结果显示携带同 一整合子的菌株在同源和非同源大肠杆菌中都有发现。 耐药基因检测结果显示，A44 组和 AS700 组分离株 aadA1、sul1、cat、blaTEM1 基因携带率分别要显著高于 (P＜0.001)对照组分离株的携带率。耐药基因间的相关 性分析结果表明 tet (A)基因与其它耐药基因元件 sul1(r=0.44)、cat(r=0.58)、 aadA1 (r=0.61)以及 intI1(r=0.37)之间为正相关。 综上，本研究认为肉牛业生产中抗菌药添加剂的长期使用与牛源大肠杆菌分离 株耐药率的升高密切相关，并且饲喂肉牛抗菌药促进了牛源大肠杆菌中Ⅰ型整合子 的获得。细菌从亲代向子代的垂直传播和细菌间可移动基因元件的水平传递共同导 致了饲养场肉牛分离的大肠杆菌中Ⅰ型整合子的扩散。此外，耐药基因与可移动基 因元件(如整合子)的关联促进了耐药性在大肠杆菌间及大肠杆菌与其它肠道细菌 间的传播。 关键词：耐药性；肉牛； Ⅰ型整合子；大肠杆菌；基因盒 Studies on Class 1 Integron-associated Antimicrobial Resistance in E. coli from Beef Cattle Fed Antibiotics Abstract Antimicrobial growth promoters (AGP) administration in agriculture promotes the emergence and the propagation of antimicrobial-resistant