蒙古羊多胸椎性状与Hoxc8基因DNA甲基化的相关性的研究.pdf

摘 要 蒙古羊的多脊椎性状具有巨大的应用价值，但是，对蒙古羊一直没有开展系统 深入的遗传研究。本研究从表观遗传学角度探索蒙古羊多胸椎变异的分子发育遗传 学机制。利用PCR扩增并分析多脊椎蒙古羊与正常蒙古羊的Hoxc8外显子序列， 并对其核苷酸和氨基酸进行了生物信息学分析，包括序列同源性比较，以及该区域 PCR 合，对Hoxc8exon．1中的甲基化水平进行定性检测；利用Bisulfite Sequencing 技术对Hoxc8 exon．1中的甲基化水平进行定位分析，对其中的CpG岛进行精确制 图，确定其甲基化发生的位置。结果如下： (1) 的DNA序列除两侧个别碱基有差异，中间序列完全一致。蒙古羊Hoxc8的exon．1 exon．1与 和exon．2序列分别与其他物种进行同源性比对，结果表明蒙古羊Hoxc8 人、小鼠、大鼠、犬的同源性达到96％以上，与斑马鱼的同源性75．8％；exon-2 与大猩猩、犬、人、小鼠和大鼠的同源性达到9l％以上，与斑马鱼的同源性74％。 (2)设计两对引物，扩增多脊椎蒙古羊Hoxc8eXOl1．1中的两段序列，进行甲 基化DNA免疫共沉淀一实时定量PCR实验，结果表明：用引物P2扩增，6只多脊 椎蒙古羊和4只正常的蒙古羊样本校正后的甲基化DNA的浓度分别为11．50％； 0．05)。 不显著(尸=O．950 (3)用Bisulfite PCR方法对Hoxc8 Seqnencing exon．1内的CpO岛中的CpG 位点的甲基化模式进行精确制图，在引物扩增的293bp区域中，包含27个CpO二 核苷酸，经重亚硫酸盐转化后，正常蒙古羊30号、28号和27号样本的CpO岛中 CpG二核苷酸中的“C’’分别有6个、3个、3个没有被转化成“T’’，即这些“C” 酸中的“C”．分别有23个、20个、21个发生了甲基化。正常与多脊椎蒙古羊的甲 两实验组差异极显著(尸=O．0020．01)。这一区域内多脊椎蒙古羊的甲基化水平远 远高于正常蒙古羊。并且每个CpG位点间的距离非常近，CpO二核苷酸非常密集。 PCR； 关键词：蒙古羊；Hoxc8：MeDIP—qPCR；DNA甲基化；BisulfiteSequencing 基因组印记；多胸椎 ofDNA in OilCorrelation Hoxc8 Study Methylation andMulti—ThoracicVertebraeCharactersof MongoliaSheep AbStract Thetrait wasworth becauseof ofMulti·Vertebraeof to it’S Mongoliasheep study excellentmeat wasnot on performance．However,theresystemgeneticstudyMongolia