组织工程神经修复大鼠坐骨神经缺损的实验的研究.pdf

中文摘要 组织工程神经修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究 摘 要 一、骨髓间充质干细胞的培养、生物学特性及向类雪旺细胞诱导分化。 目的：掌握大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养和扩增的方法，并探 讨其生物学特性及向类雪旺细胞分化的条件。 方法：无菌条件下取大鼠双侧股骨、胫骨和胸骨，并用吸取D．Hank’S 培养基中，37。C、5％C02环境下进行培养，应用全骨髓培养法结合贴壁 分离的方法进行纯化。待细胞达95％融合时，用O．125％的胰酶一0．02％的 生长特点。用MTT法测定大鼠骨髓间充质干细胞的生长曲线，从而进一 步了解其生长特性。将骨髓间充质干细胞按顺序分别加入p一巯基乙醇、 全反式视黄酸、Forskolin、神经调节蛋白、碱性成纤维细胞生长因子、血 小板源性生长因子一AA向类雪旺细胞进行诱导，在倒置显微镜下观察生长 情况及诱导后的形态学变化，S．100、GFAP免疫细胞化学染色并计算其 阳性率，Western．blot法检测S．100、GFAP蛋白的表达。 结果：原代培养显示原代细胞1—2天开始有少量细胞贴壁，形状不规 则，呈梭形成纤维样细胞形态，7-9天左右细胞可长满培养瓶底，