Stra8基因克隆表达及其功能的初步研究.pdfVIP

国家自然科学基金项目 NaturalScienceFundof 江苏省“六大人才高峰基金 Stra8基因克隆表达及其功能的初步研究 研究生：王丹 导师：李碧春 专业：动物遗传育种与繁殖 (扬州大学动物科学与技术学院，扬州225009) 中文摘要 Stem Cells，ESCs)是具有高度未分化、自我更新及分化为包含 胚胎干细胞(Embryonic 生殖细胞在内的成体器官及组织的全能性细胞。研究和利用ESCs是当前生物工程领域的热 点及核心问题之一。鸡胚胎干细胞(chicken Stem Embryonic 胚盘明区分离获得的细胞，此时胚盘约有6万个细胞，它们可在体外特定的培养基中保持多 能性和全能性，这为研究早期胚胎发育及分化提供了优良的模型。近年来，已有很多关于不 导较为常见，这可能是因为RA在胚胎干细胞诱导及细胞凋亡方面发挥重要作用，它能直接 进入细胞核内，与其受体结合后作用于靶基因，从而调控胚胎发育及组织形成。并且由RA RetinoidacidGene 激活的基因Stra8(Stimulated 8)的表达是生殖细胞进行减数分裂的关 by 键。目前，有关该基因的研究主要集中在小鼠等模式生物以及人和一些哺乳动物方面，对于 禽类该基因的研究较少，且有关该基因对于生殖细胞减数分裂的作用机制尚未阐明。 fluorescent 质粒纯化后免疫小鼠制备多克隆抗体，采用增强型荧光蛋白(enhanced 的鸡胚胎干细胞向生殖细胞分化，采用qRT-PCR及间接免疫荧光检测诱导过程中特定基因 的表达变化情况。主要研究结果如下： 基酸12个、酸性氨基酸47个以及60个疏水性氨基酸和66个极性氨基酸。将序列提交至 胸草雀的为76％，和一些灵长类、哺乳动物以及啮齿类动物同一性在40．55％之间，和其他 物种的同源性较差，上述结果说明Stra8在禽类中保守性较好。 转染NIH．3T3细胞及间接免疫荧光进行亚细胞定位。结果表明，Stra8蛋白定位于细胞质， Blot检 生转录，在蛋白水平上发生融合表达。上述结果为建立稳定表达的细胞系及研究禽类Stra8 蛋白表达及其功能发挥奠定了基础。 采用药勺法获取鸡X期胚盘，吹散胚盘以1×105／孔接种入24孔板内进行培养。摸索重 隆及酶消化联合法传代培养。结果表明，使用1．2lag的质粒量可获得较高的转染效率。经 蛋白在实验组及对照组1中有表达。结果表明诱导剂RA可在体外成功诱导转染Stra8基因 的cESCs高表达Stra8，从而使其向生殖细胞分化。 关键词：鸡；Stra8基因；抗体制备；胚胎干细胞；生殖细胞；诱导分化 川 on ofStra8anditsfounction Studygenecloning，expression M．S．Candidate：WangDan Advisor：Prof．LiBi．chun and reproduction Major：Animalgenetics，breeding and