GH和IGF--I对奶牛乳腺上皮细胞中酪蛋白合成的调节作用机制.pdfVIP

课题来源 本研究由国家重点基础研究发展计划(973计划)项目“牛奶 素和功能性氨基酸对乳腺中酪蛋白合成的调节作用” (2011CBl00803)资助。 Thisresearchwas theNationalBasic by Key supported l1 1 CB Program)(2000803)． Program(973 GH和IGF—I对奶牛乳腺上皮细胞中酪蛋白合成的调节作用机制 (扬州大学动物科学与技术学院， 』，二二I：—■’一 摘要 本研究以奶牛乳腺上皮细胞为材料，采用乳腺上皮细胞体外分离培养技术、细胞分子 乳蛋白合成调节关键激酶和调节因子基因表达以及细胞增殖与凋亡的影响。 试验一、体外分离培养了奶牛乳腺上皮细胞并鉴定其是否表达生长激素受体(GHR) 和胰岛素样生长因子．I受体(IGF．IR)。从泌乳荷斯坦奶牛活体采集乳腺组织，利用胶原酶 消化分离培养奶牛乳腺上皮细胞，通过形态学、特异性蛋白(角蛋白．18)表达、特异性基 典型的铺路鹅卵石样，能够特异性表达角蛋白．18和四种酪蛋白基因，同时检测到了GHR 和IGF—IR的表达，细胞冻存再复苏后有较高的成活率。结果表明，本研究成功分离并获取 了高纯度的奶牛乳腺上皮细胞且冻存后能够用于后续的试验，GH可能通过直接或间接通 过IGF—I作用于奶牛乳腺上皮细胞上相应的受体来发挥作用。 试验二、测定了GH和IGF．I对奶牛乳腺上皮细胞佟酪蛋白基因表达与蛋白合成的影 蛋白合成量。结果发现，GH和IGF．I单独或联合添加到无血清生长培养基中均能显著提高 差异不显著(尸0．05)，此外，无论是在基因表达水平还是蛋白水平都没有观察到GH和 blot法在蛋白水平测定了mTOR的表达量。结果发现， 的相对表达量，进一步利用Western 加IGF—I显著促进了rpS6K1 酶及调节因子的基因表达来调节K．酪蛋白的合成。 试验四、测定了GH和IGF．I对奶牛乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响。细胞处理方式 结果表明，GH和IGF．I可通过促进奶牛乳腺上皮细胞的增殖、抑制奶牛乳腺上皮细胞的凋 亡来调节乳腺上皮细胞数量和活性，进而促进泌乳。 关键词：生长激素；胰岛素样生长因子．I：奶牛乳腺上皮细胞；酪蛋白；基因表达 Mechanismand ofGHandIGF—IonCasein inBovine Regulation Synthesis Mammary Cells Epithelial Yun Postgraduate：Ji Supervisor：Prof．WangHongrong ofAnimalScienceand (College Technology,Yang出ouUniversity,225009) ABSTRACT This wasconductedto theeffectsof experiment study growth insulin-like milkcasein of kinaseand key growthfactor-I(IGF—I)onsynthesis，