苦荞细胞色素CYP81家族同源基因FtP450-R4的克隆、分子鉴定及其功能分析.pdfVIP

一兰兰=：．S-E 囊●生■技瞧尊重 …．；… 孱 m…Onli冀ne gy 陆 s麓ystem：搽http：／／ww詈w赫．jabiot‰ech．org 盛 苦荞细胞色素CYP8 功能分析 李成磊‘赵海霞1温国琴1周婧1孙家宜1姚攀峰‘陈惠1王安虎2吴琦” 1四川农业大学生命科学学院，雅安625014：2西昌学院，西昌615000 +通讯作者，wuqiwqwq@gmail．COITI 摘要细胞色素P450(cytoehrorneP450，CYP450)是高等植物中最大的酶蛋白家族之一，广泛参与植 ofcDNA ends，RACE)技术，获得苦荞(Fagopyrum cDNA全长l770 bp，3’一UTR为194 527 KM271986)。FtP450-R4bp，5-UTR为49 bp，ORF为lbp，其ORF fisoflavone 基定位于内质网，与F3’H(flavonoid3’．hydroxylase)、12’H F3’H的特征基序(GGEK)：系统进化树分析显示，FtP450．R4与拟南芥(Arabidopsis 12’H聚为一大簇，说明其可能参与苦荞黄酮类化合物的羟化或对逆境胁迫的应答。UV-B、寒冷和干旱均 能引起FtP450一R4在苦养子叶中表达量的显著变化，而在胚轴中其表达量变化不显著。利用大肠杆菌 (Escherichia formofnicotinamide．adeninedinucleotide 白能以还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(reduced phosphate， NADPH)和山奈酚为底物进行酶促反应，具有生物学活性。本研究可为了解CYP450在黄酮合成代谢中 的功能，明确苦荞黄酮代谢调控的分子机制提供了基础资料。 关键词苦荞，细胞色素P450，克隆，分子鉴定，活性鉴定 Molecular andFunctional ofa Cloning，CharacterizationAnalysis CYP81 GeneFtP450一R4from CytochromeFamilyHomologous tataricum Fagopyrum YAO LI ZHAOHai—XialWEN ZHOU SUNJia—Yil Cheng—Leil Guo—Qinl Jin91 Pan-Feng CHENHuil WangAn—Hu2、砌Qi” 1 ofLife 61 Science，SichuanUniversity,Ya’all625014，China；2 5000，China College Agricultural Xichangcollege，Xichang +Correspondingauthor,wuqiwqwq@!gmail．com