兔口腔黏膜上皮细胞的体外培养方法.pdfVIP

维普资讯 · 630 · 山西医科大学学报 (JShanxiMedUniv)2008年 7月，39 (7 文章编号： 1007—6611(2008)07—0630—03 兔 口腔黏膜上皮细胞的体外培养方法 张 岚 ， 薛明花 ， 李 冰 (山西医科大学第一I临床医学院，太原 030001；2山西省眼科医院角膜病科； 通讯作者 ，Tel：0351—8286998) 摘要： 目的 培养兔El腔黏膜上皮细胞，建立稳定的口腔黏膜上皮细胞体外培养体系。 方法 取兔 口腔黏膜组织，用 0．25％中性蛋白酶(Dispase11)分离上皮与皮下组织，采用无血清及无 3T3细胞培养体系，即角质细胞培养液 (DefinedK． SFM)培养兔 口腔黏膜上皮细胞，并进行形态学观察及免疫细胞化学检测。 结果 用中性蛋白酶可成功分离上皮与皮下组 织，原代培养 11d细胞可融合成片，呈铺路石样，鉴定为单一口腔黏膜上皮细胞。 结论 利用角质细胞培养液可成功培养 出兔 口腔黏膜上皮细胞。 关键词： 口腔黏膜上皮细胞；原代培养； 兔 中图分类号： Q813．11 文献标识码： A panm -ycultureinvitroofrabbitoralmucosalcells ZHANGLan，xUEMing-hua，LIBi (FirstClinicalMedicalCollege，ShanxiMdeicalUnizersity，Taiyuan030001， China；2DeptofCornea，ShanxiEyeHospital；*Correslxmdingauthor， ：0351—8286998) Abstract： Object／re Toexploreanewmethodforcullturingrabbitoralmucosalepithdielcellsinvitro， Methods Oralmucosal epithdialcellsinrabbitswereisolatdeby0．25％ DispaseII．andculturde bynewculturesystem DefindeK—SFM(free8erulnmdeium and3T3cells)．Theculturde cellswereidentifide bvimmunohistochme istry． Results RabbitoralmucosalepithdialtissueⅥ船 0b rainedsuecessfullybyDispaseII．After11dculture，theconfluentcellswereidnetifiedaspureoralmumselepithelialcells． Conclu,~m The resultsindicatethatthecellscouldbeculturde successfullyusingDe finde K—SFM ． Keywords： oralmuco~tepithelialcells； primaryculture； rabbits 角膜缘干细胞(1imbalstemcell，LSC)是维持角 search公司)。 膜正常结构和功能的重要因素。临床上多种眼表 1．2 方法 疾病或外伤常造成角膜缘干细胞的严重缺乏或丧 1．2．1 兔 口腔黏膜上皮的获取 取中国家兔 (山 失。自体或异体角膜缘移植虽是有效的治疗方法， 西医科大学实验动物中心提供)全麻后打开 口腔， 但仍受到供体角膜缺乏、术后并发症等限制。随着 碘伏反复擦拭消毒，用含 500u／ml庆大霉素溶液 组织工程技术发展，自体角膜缘干细胞体外培养移 冲洗3次，选择颊部黏膜，剪取约2mnl×2mnl大 植重建眼表已取得了一定的成果L1』，但对于双眼角 小，黏膜下组织用剪刀尽量去除多余皮下组织，在 膜缘干细胞完全缺乏者，利用组织工程技术将 口腔 洁净工作台上将组织翦成约 1mnl×2mnl大小放 黏膜上皮细胞构建成类角膜上皮组织成为新的研