菟丝子属5个种的种子DNA微量提取方法比较.pdfVIP

维普资讯 2008年第4期 植物检疫 PLANTQUARANTINE 菟丝子属 5个种的种子 DNA微量提取方法 比较 庄 蓉 郭琼霞 黄可辉 虞 赞 赵士熙 黄 娴 (1．福建农林大学 福州 350003 2福建出入境检验检疫局 福州) ThecomparisonoffourmethodsonDNA microextractionoffiverelatedspeciesinCuscuta．ZhuangRong2 ， GuoQiongxia，HuangKehui，YuYun，ZhaoShixi，HuangXian(1．FujianEntry—ExitInspectionand9uraan— tineBureau； Fuzhou China 350003 2．FujianAgricultureandForestryUniversity) Abstract： DNA in fiverelated speciesweedsofCuscutawasisolated touse fourmethodsincludingCTAB， SDS，MoilerandTaKaRaDNA extractionkit．Thepurity，concentrationandextractionratiosofDNA intheprod— aCtSobtainedbydifferentmethodswasanalyzedandcompared．ResultsshowedthatSDSwasthebestmethodto extractthegenomicDNA inweedsofthefivespecies． Keywords： Cuscuta ，DNA extraction，weed 摘要 本研究以Cuscuta属中5个种的种子为实验材料，分别采用CTAB、SDS、Moller与TaKaRaDNA 提取试剂盒这4种方法 提取DNA；并对不同方法所提取DNA的纯度、DNA质量浓度、DNA提取率进行比 较分析。结果表明：用SDS的方法对Cuscuta属5个种的种子DNA的提取为最佳方法。 关键词 菟丝子属 杂草种子 DNA提取方法 中图分类号 $41—30 菟丝子属 (Cuscuta)杂草是 1年生寄生于茎部 1．1 试验材料 的全寄生草本植物，是危害农林作物的寄生性杂 本试验选用Cuscuta属5个近似种的种子，共7 草，也是植物病害的寄主。菟丝子属均属于我 国进 个样品(1—7号)作为试验研究材料。各个种的种 境植物检疫性有害杂草 ，也是全国植物检疫性有害 子材料来源 由以下检验检疫相关实验室提供 (表 生物。在进 口检验检疫中，Cuscuta属多以种子形 1)。 态混杂于进 口粮、饲料粮、牧草和蔬菜等的种子中； 表 1 菟丝子种子样品来源 且 Cuscuta属各个种的种子较小，形态又十分相 似 ¨一z；同时由于货物的装卸，种子的外表形态往往 被磨损，这就给以种子鉴定为主的口岸的杂草检验 检疫造成极大的困难。而以遗传物质DNA为基础 的分子标记具有可靠、不受外界影响的特点 ，所 以利用现代的PCR基因检测技术进行鉴定，可以 达到快速准确的鉴定效果；同时对于克服因饱满 度、地区间个体差异的种间鉴定也具有重要意义。 1．2 种子 DNA提取 鉴于快速提取大量的高纯度DNA是进行分子水平 1．2．1 CTAB(十六烷基二乙基溴化铵)方法 鉴定重要基础，本试验通过对 Cuscuta属的5个近 取菟丝子种子(0．05g)加液氮速冻后研磨至粉 似种的种子的4种 DNA提取方法的比较研究，从 末 ；移人 1．5mL离心管中；然后加入 600~LCTAB 而筛选出Cuscuta属种子DNA提取的最佳方案。 提取缓冲液 [2％ (w／v)CTAB，100mmol／LTris· 1 材料与方法