表达PRRSV+GP5重组沙门氏菌构建鉴定.pdfVIP

养猪生产与猪病防治专题蟋》 413 T030054 表达PRRSVGP5重组沙门氏菌的构建及鉴定 张明亮 张春杰程相朝赵战勤 李银聚昊庭才 李小康李正杨宁宁 (河南科技大学动物科技学院，河南洛阳471003) 引言／目的 猪繁殖与呼吸综合症(PRRS)是一种猪的高度接触性传染性疾病，给我国养猪业带来了严重的损 失。疫苗免疫预防是防控PRRS的最佳方法。然而，通常的灭活苗和活疫苗都不能产生令人满意的免疫 效果，为此，开发有效、安全的新型疫苗势在必行。本研究构建了携带猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSv) ORF5基因的减毒沙门氏菌重组菌，从而探讨PRRS活载体疫苗的可行性。 材料方法 首先在本室已构建的AcrpC78一l缺失株的基础上通过自杀性质粒介导的等位交换技术两步法筛选猪 PYA—ORF5。将PYA—ORF5电转化)kAcrpAasdC78—1中，命名为AcrpAasd 性进行初步检测。 结果 成功构建了猪霍乱沙门氏I翥AcrpAasdC78一l双缺失株，该缺失株的生长必需外源的DAP(二氨基庚 因，但其生化特性和生长速度与C78一l相比明显改变；成功构建]AcrpAasd 其在体内外均能够稳定分泌表达PRRSVGP5蛋白，同时，western blotting检验也证实，该GP5蛋白具有 较好的反应原性。 讨论 沙门氏菌是侵袭性胞内细菌，近年来利用其作为载体携带外源基因已成为免疫研究的热点。由于哺 乳动物组织中不含DAP，冈此asd基冈缺失菌在不含DAP的培养基中或动物体内均被降解。本研究构建 C78—1形成瓦补，丢失PYA．ORF5 的PYA—ORF5质粒含有asd基因，电转化AcrpAasdC78．1后可与AcrpAasd 的细菌则不能存活。PRRSVORF5基因编码的GP5蛋白在病毒感染、细胞结合及病毒吸附中起霞要作用， 也是淋巴细胞增生性应答的靶点和PRRSV重要的中和抗原，在诱导机体产生体液免疫和细胞免疫的过 程中发挥着藿要作用。实验结果表明，AcrpAasd 有较好反应原性的GP5蛋白。本研究以减毒沙门氏菌作为活载体成功表达了PRRSVGP5蛋白，为PRRS 新犁疫苗的研发提供了理论依据。 参考文献(略)