Piggybac和Passport转座子系统在水牛成纤维细胞中的应用.pdfVIP

274 02011年学术年会 T020028 Pi 王锦 罗婵马 帆刘金凤王梦刘庆友石德顺 (广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，广西南宁 530005) 引言目的 因转移工具，PB转座系统具有负载容量较大、转座效率高等优点，在哺乳动物基因转移载体及基因组 功能研究中具有重要的意义【1’21。PP转座系统也能在多种哺乳动物的细胞中进行转基因表达，由于其整 合的拷贝数少，有利于减小对宿主基闪组的干扰f3．4J。本研究检测了PB和PP转座子系统在水牛的成纤维 细胞的转基因情况，以期为通过转基因提高水牛的生产性能提供前期探索。 材料方法 600 组织块法分离培养水牛胎儿耳部成纤维细胞，取3～4代培养细胞使用脂质体2000进行转染。G418 u 结果 架的载体转染对于细胞克隆数没有影响，与未共转染转座酶载体的PB和PP转座子的细胞克隆数没有差 统得到的细胞克隆形成数足PP系统的2倍，差异极显著(尸O．001)。 讨论 水牛是南方重要的生产资源，肉、役、乳兼用。水牛奶营养价值高，但水牛产奶蛩低，通过转基因 的技术期望能培育出高产奶量的水牛品系。Piggybac转座子自2005年用于转基因小鼠的生产后，已经广泛 转座子家族，外源基因整合的拷贝数少，因而在G418筛选后，抗性克隆形成数明显低于PB转座子。转座 酶辅助质粒与转座子共转染后可以显著提高抗性克隆形成数。有研究发现Tcl／mariner转座子家族具有转座 酶过量表达抑制效应，而PB转座子的研究结果不一，因而这两个转座二f在水牛成纤维细胞是否存在过量 表达抑制效应还需进一步试验验证。PB转座子偏好于基吲的内含子区，TIAA位点整合；PP转座子整合 位点为TA二核苷酸处，在水牛细胞中其整合位点是否遵循这个规律也有待进一步证实。 参考文献 cells S，WuX，LiGetal．，Efficienttranspositionofthe andmice[J]．Cell， [1lDing 2005．122(3)：473．83． Yusal(，ZhouMA，el formammalian NatlAcadSciUS 121 L，Li a1．，AhyperactivepiggyBactransposase applications[J]．Proc ‘ A．2011．108(4)：1531-6． ClarkK D Ll(’et ofthe with and 131 J。CarlsonFFoster a1．，Enzymaticengineeringporcinegenometl-ansposons Biotechn01．2007．7：42． recombinaseslJi．BMC ClarkK D M nativeTcl from activeinvertebrate [41 J，CarlsonFLeaverJ，et flatfish，is a1．，Passport,a transposon functionally AcidsRes．2009．37(4)：1239-47． cells[J]．Nucleic