软珊瑚Sarcophyton tortuosum内生真菌SarcoF代谢产物研究.doc

软珊瑚Sarcophyton tortuosum内生真菌SarcoF5代谢产物研究 蔡永通 （中山大学化学与化学工程学院，广东 广州 510275） 摘要：本课题对从扭曲肉芝软珊瑚Sarcophyton tortuosum分离到的一株真菌SarcoF5展开研究，以GYP+100%海水为培养基对该真菌进行大规模的培养，待培养40天后，其培养液用乙酸乙酯提取，培养液提取液经低温减压浓缩，得到培养液粗提取物43.16g。接着对培养液粗提取物进行分离，纯化得到三个化合物，分别命名为SarcoF5-1，SarcoF5-2，SarcoF5-3。然后用核磁共振和MS对这三个化合物进行结构鉴定，确定其结构分别为青霉酸，(E)-3-isobutyl-6-methyl-4- oxohept-2-enoic acid和(Z)-3-(1-hydroxy-2-methylpropyl)-6-methyl-4-oxohept-2-enoic acid，其中SarcoF5-2和SarcoF5-3两个是新化合物。 关键词：扭曲肉芝软珊瑚 SarcoF5 提取 分离 纯化 结构鉴定 前言 自从1986年苏镜娱等从扭曲肉芝软珊瑚Sarcophyton tortuosum中得到2个罕见的四环四萜化合物methyl sartortuoate和methyl isosartortuoate [1,2,3]，打破了文献记载中只有胡萝卜素类型碳架的现状以来，扭曲肉芝软珊瑚马上成为了研究热点。接着中山大学药学院蓝文健等[4,5] 又从扭曲肉芝软珊瑚的甲醇和氯仿浸提物的乙酸乙酯萃取部分分离得到3个新的四萜化合物methyl tortuoate A，methyl tortuoate B，methyl tortuoate C。它们对老鼠S180，CNE-2， P-388，HT-29，CNE-1显示了不同程度的抑制作用。 海洋生物中单萜，倍半萜，二萜，三萜化合物广泛存在，但这种四萜化合物是首次从该种属软珊瑚中得到。而很多文献报道中指出,许多以前认为是由植物和无脊椎动物产生的活性物质实际上是由与其共附生的微生物产生的。这些化合物是来源于软珊瑚本身，还是由软珊瑚附生微生物产生而在珊瑚体内积累？我们课题已经开展了该珊瑚附生微生物的分离工作，已经分离、纯化了30多株真菌和细菌，深入研究这些软珊瑚Sarcophyton tortuosum的附生微生物，将能揭示这些具抗肿瘤活性的四萜类化合物的真正来源。另外，系统地研究附生微生物的代谢产物，也必将能发现系列其它结构类型的新化合物、或者是药理活性的有用代谢产物，为海洋药物的发展积累数据，也为进一步研究生物之间的相互作用及其生态学方面的研究打下基础。 实验部分 菌种 扭曲肉芝软珊瑚内生真菌SarcoF5分离自扭曲肉芝软珊瑚Sarcophyton tortuosum，在GYP＋100％海水的培养基上，生长良好，这个真菌还能产生丰富的代谢产物。菌种保藏于中山大学化学于化学工程学院天然产物研究室。 试剂与仪器 乙酸乙酯，A.R.，天津市福晨化学试剂厂；石油醚，A.R.，天津市富宇精细化工有限公司；甲醇，A.R.，广州市东红化工厂；二氯甲烷，A.R.，天津市富宇精细化工有限公司；三氯甲烷，A.R.，天津市富宇精细化工有限公司；羧甲基纤维素钠，天津市福晨化学试剂厂；蛋白胨，广东环凯微生物科技有限公司；酵母膏，广东环凯微生物科技有限公司；粗海盐，海南省莺歌海盐场；葡萄糖，山东天力药业有限公司；LDZX-30KB立式压力蒸汽灭菌器，上海申安医疗器械厂；星海旋转蒸发器，无锡市星海王生化设备有限公司；Mercury－Plus?300图1 分离流程图 图2 分离得到化合物结构图 3 结果与讨论 3.1 SarcoF5-1结构鉴定 图3 SarcoF5-1结构图 SarcoF5-1为无色透明针状晶体，ESI-MS[m/z 171.1(M+1)+]，分子式为C8H10O4，不饱和度为3。其1D NMR（表 2-1）波谱数据表明存在下面的基团：1个甲氧基（δC，57.88，C-8）；δH：3.93（3H，s，H-8）； 1个双取代双键（δC，86.32，C-3；171.17，C-4）δH：5.23（1H，s，H- 3）；和一个单取代双键（δC，133.97，C-9；114.36，C-10）；δH：5.21（1H，s，H-10a）；5.50（1H，s，H-10b）；一个酯基（δC，172.02，C-2；109.58，C-5）；一个甲基（δC，17.43，C-12）；δH：1.96（3H，s，H-12）。根据这些再通过推断确定了该化合物的结构。从而确定了该化合物为青霉酸。青霉酸是一个很强的多聚乙酰类霉菌毒素，是由Alsberg等[6]在1913年首先分离出来的