100150136化药1005紫外快速测定法.docVIP

紫外快速测定法测维生素C的含量 化药1005 100150136 吴郡 实验原理： Vc的2.6—二氯酚靛酚容量法，操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响。紫外快速测定法，是根据Vc具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者消光值之差，通过查标准曲线，即可计算样品中Vc的含量。 ????????????????????????? ?????????????? μ×V总 Vc的含量（μg /g）= —————— V1×W总 式中： μ——从标准曲线上查得的抗坏血酸的含量（μg） V1——测消光值时吸取样品溶液的体积（ml） V总——样品定容体积（ml） W总——称样重量（g） 二、仪器与试剂：仪器：紫外分光光度计、分析天平、离心机、容量 瓶（10ml，25ml）、移液管（0.5ml,1.0ml） 1．抗坏血酸标准溶液的配制：用分析天平准确称取抗坏血酸10mg，加2ml 10%盐酸，加蒸馏水定容至100ml，混匀。此抗坏血酸溶液的浓度为100μg/ml。 2．取带塞刻度试管8支并编号，分别按表内所规定的量加入抗坏血酸标准溶液和蒸馏水。 ? ? 1 2 3 4 5 6 7 8 标准抗坏血酸溶液加入体积（ml） 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.8 1.0 蒸馏水加入体积（ml） 9.9 9.8 9.7 9.6 9.5 9.4 9.2 9.0 总体积（ml） 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 抗坏血酸溶液浓度（μg/ml） 1.0 2.0 3.0 4.0 50 60 80 10 标准抗坏血酸溶液吸光值A 0.188 0.259 0.318 0.394 0.493 0.568 0.737 0.866 ? ? 3．消光值的测定：以蒸馏水为空的，在243nm处测定标准系列抗坏血酸溶液的消光值，以抗坏血酸的含量（μg）为横坐标，以相应的消光值为纵坐标作标准曲线。标准曲线： （二）样品的测定 1．样品的提取：将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取10.00g于研体中，加入4-10ml 1% HCl，匀浆，转移到50ml容量瓶中，稀释至刻度。若提取液澄清透明，则可直接取样测定，若有浑浊现象，可通过离心（1 0000g, 10min）来消除。 2．样品的测定：取1ml提取液，放入盛有2ml 10% HCl的50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白，在243nm处测定其消光值。 3．待测碱处理液的制备：分别吸取1ml提取液，2ml蒸馏水和4ml 1M NaOH溶液依次放入50ml容量瓶中，混匀，15min后加入4ml 10% HCl，混匀，并定容至刻度。以蒸馏水为空白。在243nm处测定其OD值。 4．由待测样品与待测碱处理样品的消光值之差和标准曲线，即可计算出样品中Vc的含量。 5．也可直接以待测碱处理液为空白，测出待测液的消光值，通过查标准曲线，计算出样品的Vc的含量。 样品 待测碱 吸光度（A值） 0.236 0.160 0.236 四、数据整理 y=样品吸光值-待测碱吸光值=0.236-0.160=0.076 将y值代入函数式:y = 0.0775x-0.1001 x=μ=2.272μg ??? μ×V总 2.272 ×50 Vc的含量（μg /g）= = =568μg／g V1×W总 1×0.2 本实验测得柠檬中Vc含量为568μg／g即每100克含568毫克 实验分析：由于Vc会被氧化，同时不同植物体内不同程度地含有已被氧化成深色产物的鞣酸等成分，为尽量避免背景物质、有色物质的产生，准确测定Vc含量，实验过程中应尽量迅速操作。 2，6-二氯靛酚滴定法的优点：它具有简便、快速、比较准确等优点，适用于许多不同类型样品的分析。 但有下列缺点:1.在生物组织内和组织提取液中，抗坏血酸能以脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的形式存在。它们同样具有维生素的生理功能，但不能将2，6-二氯酚靛酚还原脱色。（总抗坏血酸的量常用2，4-二硝基苯肼法和荧光分光光度法测定）2.生物组织提取物和生物体液中常含有其它还原性物质，其中有些在同样的条件下也可使2，6-二氯酚靛酚还原脱色。3.在生物组织中，常有色素类物质存在，给滴定终点的观察造成困难 . 分光光度法 优点： 1）无需标准化的试剂溶液，免去了大量的标准物质的准备工作（配制，标定） 2）只需要一个高质量的供电器，计时器，小铂丝电极，且易于实现自动化控制 3）若电流