MxA蛋白对HepG2.2.15细胞HBV复制的影响.pdfVIP

安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2011Mar；46(3) ·213 · MxA蛋白对 HepG2．2．15细胞 HBV复制的影响 潘 颖，管世鹤，陆应玉，杨 凯，程中乐 摘要 目的 分析 比较 干扰素 (IFN．)、抗黏液病毒 A 模型，应用基因转染等技术，分析比较 IFN—ot、MxA (MxA)蛋白及 IFN-d联合 MxA蛋白对HepG2．2．15细胞中 蛋白及 IFN—联合MxA蛋白对HBV复制和抗原分 乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法 以肝胚瘤细胞株 泌的影响，为临床联合疗法治疗乙型肝炎提供实验 HepG2。2．15细胞为细胞模型，以IFN—Ct、基因转染表达MxA 依据。 蛋白及 IFN·d与 MxA蛋 白联合等方式处理细胞 ，Western blot法检测MxA蛋白在细胞中表达；ELISA法和实时荧光定 1 材料与方法 量 PCR技术分析细胞上清HBV抗原和细胞外 HBVDNA的 1．1 材料 pcDNA3．1一nag—MxA (wild-type)由加 表达。结果 IFN一0l处理后，HepG2，2．15细胞分泌的HBV 抗原未见显著减少，而 MxA蛋白单处理组HepG2．2．15细胞 拿大 Sherbrooke大学药学院Dr．Boulay惠赠；IFN． 分泌的HBV抗原显著减少 (P0．05)；联合处理组具有抑 alb购 自深圳科兴生物工程有限公司；抗Flag一抗 制HBV抗原分泌的作用(P0．01)，但3种处理组均不能抑 购 自 SBA 公 司，二抗 购 自中杉 金 桥 公 司； 制细胞外 HBVDNA的表达。结论 在体外细胞模型中， HepG2．2．15细胞 由本实验室保存 ；转染试剂盒脂质 IFN—Ot单独处理不能有效抑制 HepG2．2．15细胞中HBV复 体Lipofeetamine 2000购 自Invitrogen公司；HBV 制及抗原分泌 ；MxA蛋白能够抑制 HBV抗原分泌；IFN一与 DNA荧光定量试剂盒购 自上海克隆生物高技术有 MxA蛋白联合作用具有抑制HBV抗原分泌的作用，但不影 限公司；质粒提取试剂盒购 自Promega公司；ELISA 响细胞外 HBVDNA复制。 试剂盒购 自中山生物工程有限公司。 主题词 肝炎病毒 ，乙型；干扰素仪 1．2 实验分组 HepG2．2．15细胞按照处理方式分 自由词 MxA蛋白 为4组：空 白对照组、IFN一0【组、MxA组 (pcDNA3．1- 中图分类号 R373．21；R446．6；R978．7 Flag。MxA重组质粒转染)、联合组(IFN—o【联合pcD— 文献标识码 A 文章编号 1000—1492(2011)03—0213—03 NA3．1．Flag．MxA重组质粒转染)，每组设立2个平 乙型肝炎病毒 (hepatitisBvirus，HBV)感染引 行组 。 1．3 细胞培养与质粒转染 HepG2．2．15细胞复苏 起的乙型肝炎是一种严重危害人类健康和生命的传 后用含 10％胎牛血清、100U／ml青霉素、100U／ml 染性疾病。据世界卫生组织报道，全球约3．5亿人 链霉素、2mmolfL谷氨酰胺的DMEM培养液培养。 为HBV感染者，该人群往往成为肝硬化和肝癌的高 HepG2．2．15细胞转染前 1天行 HepG2．2