前列腺癌患者外周血CD4＋ CD25＋调节性T细胞与Foxp3 mRNA的表达及临床意义.pdfVIP

· 346 · 广东医学 2011年2月 第 32卷第3期 GuangdongMedicalJournal Feb．2011，Vo1．32，No．3 前列腺癌患者外周血 CD4+CD25+调节性 T细胞与 Foxp3mRNA的表达及临床意义 吴振权。，杨明 ，张海滨 ，李辽源 ，徐文峰 ，肖平 ，林哲 ，夏桃林 广东省佛山市第一人民医院泌尿外科(52800o)； 中山大学附属第三医院泌尿外科 (广州510630) 【摘要】 目的 探讨CD4 CD25调节性T细胞和Foxp3在前列腺癌发病过程中的作用。方法 应用流式 细胞术检测3O例前列腺癌、40例前列腺增生患者及 20例健康志愿者外周血单个核细胞 (PBMC)中CD4 CD25 调节性T细胞 占CD4 T细胞的比例 ，应用RT—PCR技术检测人外周血PBMC中Foxp3基因的表达。结果 前 列腺癌患者外周血PBMC中CD4 CD25 调节性T细胞 占CIM T细胞的比例高于前列腺增生患者和健康志愿 者，前列腺增生患者和健康志愿者之间差异无统计学意义(P0．05)；前列腺癌患者外周血PBMC中Foxp3mRNA 的表达水平高于非肿瘤患者表达水平(P0．05)，前列腺增生患者和健康志愿者之 间差异无统计学意义 (P 0．O5)。结论 CD4CD25调节性T细胞及其特异标志物Foxp3在维持 自身免疫稳定的同时对肿瘤免疫具有抑 制作用，该细胞群 比例的增加可能参与前列腺癌的发生。 【关键词】 前列腺癌；CD4 CD25调节性T细胞；Foxp3 CD4CD25调节性T细胞是健康个体T细胞库 IgG1一FITC、IgG1一PE单克隆抗体购 自美国BD公司； 的组成成分 ，该细胞群是一类具有免疫抑制效应的细 Trizol购 自Invitrogen公司；RNA反转录试剂盒A3500购 胞 ，能抑制T细胞对外源和 自体抗原的免疫反应 ，在 自Promega公司；Real—timePCRMasterMix(Norma1)购 维持对 自身成分免疫耐受的同时 ，也可能阻止了机体 自Toyobo公司；人淋 巴细胞分离液购 自澡洋生物公司； 对 自体同源肿瘤细胞的免疫。因此，CD4 CD25调节 PCR引物和TaqMan探针由Invitrogen公司合成。 性T细胞很可能影响着免疫系统对肿瘤抗原的应答， 1．3 方法 从而影响着肿瘤的发生和发展。Foxp3是CD4 CD25 1．3．1 流式细胞术检测分析 取新鲜抗凝全血 100 调节性 T细胞的关键分子，能调控 CD4 CD25调节 L于测试管内，分别与适当比例的荧光标记的相应抗 性 T细胞的分化发育、表达及功能维持，Foxp3看作是 体，}昆匀后在室温避光孵育 20min，加入2mL红细胞 CD4 CD25调节性 T细胞的特异性标志…。本研究 裂解液(BDbiosciences)混匀后室温避光孵育 10min， 通过检测前列腺癌患者外周血中CD4 CD25 调节性 12000r／min离心5min，弃上清，加入2mL磷酸盐缓 T细胞数量及 Foxp3mRNA的表达 ，探讨 CD4 CD25 冲液(PBS)混匀后再洗涤 1次，最后加入 500IxLPBS 调节性 T细胞与前列腺癌发生、发展的关系及 临床 重悬后立即上机检测，测定时以前向散色 (FSC)和侧 意义。 向散色光 (SSC)设定淋 巴细胞 门Rl，分析 门内CD4、 1 资料与方法 CD25细胞亚群表达情况，分析结果以阳性的百分率 1．1 一般资料 30例前列腺癌患者和40例前列腺增 (CD4 CD25 细胞 占CIM 细胞的百分率)(％)表示。 生患者均来源于2008年 10月至2009年4月在广东省 1．3．2 调节性 T细胞 的分离及细胞总RNA提取 应 佛山市第一人民医院泌尿外科住院的患者。前列腺癌 用Fieoll密度梯度离心法分离 出外周血单个核细胞 患者年龄53～80岁，平均 (69．73 ±7．26)岁。前列腺 (PBMC)，然