仪器分析实验柱色谱4.16.pptVIP

柱色谱：1905 年俄科学家茨维持首次采用装有碳酸钙的柱子，分离叶绿素获得成功而创立了柱色谱法。 分类：常用的有吸附色谱和分配色谱两类。前者常用氧化铝或硅胶为吸附剂。后者以硅胶，硅藻土等为支持剂，以吸收大量的液体为固定相。（答1）当加入洗脱剂时，由于不同化合物吸附能力不同，因而以不同的速度沿柱向下流动，继续洗脱时，吸附能力弱的组分随溶剂首先流出。在连续洗脱过程中，不同组分或不同色带就能分别收集，从而达到分离纯化的目的。 柱色谱与薄层色谱之间的区别与联系（答2） 薄层色谱和柱色谱不同点：固定相的形状和展开剂的移动方向 薄层色谱和柱色谱相同点：在分离原理上基本相同。 常用洗脱剂的极性： 石油醚＜ 环己烷＜ 四氯化碳＜ 甲苯＜ 苯＜ 二氯甲烷＜ 氯仿＜ 乙醚＜乙酸乙酯＜ 丙酮＜ 乙醇＜甲醇＜ 水＜ 乙酸 装柱时应该注意的问题（答4） 装柱时应该注意均匀，不能有气泡，裂缝，否则样品可能顺缝隙流动而不吸附，影响样品的分离，应用质软的物体如吸耳球等轻轻敲击柱身，促使吸附剂装填紧密，排除气泡。最终应使吸附剂的上端平整，无凹凸面． 洗脱时应注意：（答10） （1）向柱内加入95%乙醇溶液洗脱（可以通过注射器沿管壁或安装滴液漏斗）在恒压或加压条件下进行洗脱。控制流出速度1滴/秒。逐渐出现色层带分离。 （2）第一色层带到达色谱柱底部时，立即用锥形瓶收集第一色层的溶液，直到其完全被洗出。【注意】洗脱时切勿使溶剂流干！ （3）然后，改用水溶液作为洗脱剂，当第二色层带到达色谱柱底部时，立即收集第二色层的的溶液，直到其完全被洗出。 （4）用量筒分别量取所分离出来的两种溶液的体积后，倒入指定的回收瓶中。 （5）分离结束后，应先让溶剂尽量流干，然后倒置，用吸耳球从活塞 向管内挤压空气，将吸附剂从柱顶挤压出。使用过的吸附剂倒入垃圾桶里。 实验三 柱色谱法分离甲基橙和甲基蓝 一、实验目的 1. 了解柱色谱的分离原理。 2．掌握柱色谱法的实验操作技术。 三、仪器和试剂 1.仪器 锥形瓶、玻璃漏斗、色谱柱 2.试剂 中性氧化铝、石英砂、乙醇（95%、甲基橙、亚甲基蓝。 五、实验步骤 装柱：1、装色谱柱：（1）取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花将色谱柱垂直固定在铁架台上。(2)关闭活塞，向柱中倒入溶剂95%乙醇（也是洗脱剂，至柱体积的1/2） （3）填固定相： 同时通过漏斗慢慢装入8g Al2O3, 使其逐渐沉入底部。用洗耳球敲打柱身使氧化铝装填紧密，打开活塞，用小锥型瓶承接, 控制滴速为1 滴／秒,装完后在上面加一层石英沙（约5mm）。操作时要注意吸附剂始终不能露出液面。 实验步骤（续） 加样：当乙醇液面刚好流至石英砂平面相切时，立刻关闭活塞，向柱内滴加10滴甲基橙和亚甲基蓝的混合物（乙醇溶液），打开活塞 洗脱：待液面降至石英砂层时用少量95%乙醇洗下附在管壁的色素（少量多次），然后用95%乙醇作为洗脱剂，控制流速（约为1滴/秒），当亚甲基蓝色带洗出时，更换锥形瓶收集洗脱液，直至洗脱液无色。更换锥形瓶，并改用蒸馏水继续洗脱，用另外的锥形瓶收集，直到甲基橙全部被洗脱下来。 思考题 （1）装柱不均匀或有气泡，裂缝，将会造成什么后果？如何避免？ （2）极性大的组分为什么要用极性较大的溶剂洗脱？ （3）在氧化铝柱子上若分离下列各组混合物，哪一个组分先被洗脱下来？ * 柱色谱 Column chromatography 1、色谱法的基本原理? 2 、柱色谱与薄层色谱之间有怎样的区别与联系 3 、如何选择洗脱剂？ 4 、装柱时，应该注意哪些问题？ 5、 色谱柱一般的直径和高度比例是多少? 6 、柱色谱分为几类?分别用什么作吸附剂? 7、 常用的三氧化二铝吸附剂分为几种? 8、 吸附剂在使用前必须如何处理? 9、 被分离样品的量与吸附剂用量之比是多少? 10、 洗脱时要注意些什么 ? 11、实验三、柱色谱法分离甲基橙和亚甲基蓝 3、柱色谱（柱层析） （1）在薄层色谱的基础上，进行混合物的分离 （2）分类：吸附型（Al2O3、硅胶G等作吸附剂） 分配型（硅藻土、纤维素等作支持剂）（答6） （3）吸附柱色谱 1）吸附剂：一般采用表面积很大，经过活化的多孔 性或粉状的固体 氧化铝（酸性、中性、碱性）3种（答7） a、用前应纯化并在105-110℃活化0.5h，于烘 箱中自然冷却 (答8) b、吸附剂用量